为什么用 ELISA 试剂盒检测样品显色无差异？

显色弱灵敏度低。在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中孔的显色比较浅，即只有微弱的信号呈现。 出现该现象的可能原因： 1.产品过有效期，试剂没有按规定进行适当的保存。 2.试剂，标准品或者样品在使用前没有平衡到室温。 3. 少加了试剂的量或者加入试剂的稀释比例不当。 4. 洗板或者加样过程中，酶标物受污染失活。 5.孵育时间和孵育温度未达到实验要求。 6.洗涤液稀释倍数不符合要求，洗板次数过多，洗板冲击力过大，洗板浸泡时间过长。 7.底物溶液TMB显色时间太短。

严格正确稀释

任何事情都要从规范开始进行

（1）待测血清浓度过低，或者是稀释倍数过多。 （2）操作问题。 （3）注意反应的条件，要严格控制。

有预实验过么，确定样本和试剂盒是否结合么

1、操作问题，不解释。 2、检测的位点疏水。 3、预计检测的亚基和你样本中的不一样，比如不同物种、不同前处理导致的。 4、样本降解了。

如果你操作过程正规，可能是过度稀释了，建议你正确稀释。还有一个就是温度的问题，一定按说明书的温度，否认试剂不能发挥作用，就会功败垂成，我的一点经验之谈。

样品是如何收集的，血清保存在哪里，保存了多久，上样时稀释了多少倍，有没有按照说明书去稀释样品，（有的试剂盒会给出尿液、血液、细胞上清不同的稀释试剂），操作过程是否正规，此外，最重要的是，你的检测的细胞因子是不是本身在血清中含量就很低，或者样本之间表达量的确没有差异。

血清的提取和保存注意温度，一般保存在-80度的超低温冰箱

如果待测样品没有问题，操作过程没有错误的话，有可能是稀释过度造成的