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提取血清中microRNA及后续实验

相关实验:用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子

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caremmmm

广大科研家人朋友们,我想请教一下,提取血清中microRNA

1.提取血清中microRNA时,最好用专用的microRNA提取试剂盒呢?还是TRIZOL方法提取也可以呢?

2.逆转录分别用目的microRNA的茎环结构下游引物去逆转录、内参基因U6的常规下游引物去逆转录就可以是嘛?

3.qPCR的试剂选择普通的SYBR方法就可以嘛?因为确实看到一些需要用探针法上定量PCR检测的

救救孩子吧

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3 个回答

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loveliufudan

有帮助

1. 对于血清中的microRNA的提取,专用的microRNA提取试剂盒和TRIZOL方法都是可以的。试剂盒通常更加方便,而且更容易获得高质量的RNA,尤其是对于microRNA这种较小的RNA分子。然而,TRIZOL方法也可以有效提取RNA,包括microRNA,只是可能需要更多的优化。具体选择哪种方法,取决于你的实验室条件和预算。

2. 通常情况下,对microRNA的逆转录是需要使用特定的microRNA的茎环结构下游引物的,同时你也需要一个内参基因,比如U6,来校准和控制你的实验条件。这个内参基因的引物通常是常规的下游引物。

3. 对于qPCR的试剂,普通的SYBR Green方法是可以的,尤其是在预算有限的情况下。但需要注意,SYBR Green是会与所有的双链DNA结合,所以有可能会检测到非特异性的扩增产物。探针方法如TaqMan则更为特异,因为它们设计的探针只有在目标序列存在时才会发出信号。所以选择哪种方法,又一次取决于你的实验需求和预算。

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huarenqiang5

有帮助

提取血清中microRNA,TRIZOL方法也可以提取。建议使用专用试剂盒提取更好。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

有专门的提取试剂盒,trizol方法也可以用于提取,就是纯度和效率可能不如专门的试剂盒

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