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使用同一种trizol试剂盒提取RNA,条件也一致,但产量总是不稳定。是因为每次加试剂量有差异,导致离心时没有甩干的缘故吗?

相关实验:TRlzol 试剂一步分离 RNA 实验

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月玥梓

试剂盒:达科为组织/细胞总RNA提取盒

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3 个回答

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vae1476

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你的样本每次是否一样呢,如果需要排除一下条件,可以每次加入一个质控样本,进行对照

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丁香粉猪猪

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样品前处理注意点:

选择新鲜血液,不得超过4小时。

选择新鲜组织,生长旺盛的组织。

选择新鲜的幼嫩组织。

选择处于生长旺盛的时期收集细胞。

RNA纯化要求:

纯化后不应存在对酶(如逆转录酶)有抑制作用的物质。

排除有机溶剂和金属离子的污染。

蛋白质、多糖和脂类分子等的污染降到最低程度。

排除DNA分子的污染。

RNA提取的注意事项:

杜绝外源酶的污染。

严格戴好口罩,手套。

实验所涉及的离心管,Tip头,移液器杆,电泳槽,实验台面等要彻底处理。

实验所涉及的试剂/溶液,尤其是水,必须确保RNase-Free。

阻止内源酶的活性。

选择合适的匀浆方法。

选择合适的裂解液。

控制好样品的起始量。

明确自己的提取目的。

任何裂解液系统在接近样品最大起始量时,提取成功率急剧下降。

RNA提取成功的唯一经济的标准是后续实验的一次成功,而不是得率。

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whilt-shirt

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我们实验室是直接用trizol法提RNA,没有出现你说的这种情况,产量不稳定可能是试剂盒本身的原因。另外,加试剂时最好用高精度的移液枪,避免系统误差。

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