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注意细胞和trizol的比例,一般情况,6cm皿长满,可以用1ml的trizol,然后收完不要立即提,室温放置半小时,充分裂解后再提。
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可以延长沉淀时间。如果核酸浓度低.采取低温沉淀、并延长沉淀时间.可以获得非常好的效果。RNA提取过程中最应该注意的就是RNA酶的防止 所有操作在超净台完成 然后一定要带一次性手套,而且一直要换。
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1、使用更有效的破碎/匀浆方法。RNA如果不能被有效释放出来,得率是会降低的。液氣捣碎、酵消化破壁(Lysozyme/Lyticase)、电动匀浆器匀浆,虽然麻烦,但都是获得高得率的有效手段
2、抽提试剂的更换。假如得率低不是由匀浆方法不彻底引起.则可能是所使用的试剂的裂解能力差导致。最合理的做法是:使用更多的裂解液 用完后换厂家。另外 可以改用不使用苯酚、氯仿提取的试剂方法:使用苯酚、氛仿抽提的方法由于不可能全部取出上清.RNA的损失是比较大的
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