如何避免qpcr阴性的污染

每天要对这些区室进行清洁消毒，并紫外照射，特别是当阳性对照溅撒，环境检测阳性或者仪器污染时，严格按照消毒程序对区室消毒，并验证消毒效果。操作过程中避免手套接触可能被污染的地方，阳性对照最后加入，加后要特别注意枪头不要蹭到其他反应孔。

可以采取以下措施：

1. 分开前和后实验区域：将前PCR实验区域（样品处理、DNA提取等）和后PCR实验区域（qPCR试剂制备、扩增反应设置等）分开，使用不同的工作台、工具和试剂，避免交叉污染。

2. 使用RNase/DNase抑制剂：在样品处理和反应液制备过程中，添加RNase/DNase抑制剂以防止外源DNA的污染。确保抑制剂的质量和有效性。

3. 避免DNA模板污染：在DNA提取和样品处理过程中，严格控制实验条件，避免污染源接触DNA模板。使用专门的PCR工作台和无菌操作技术。

4. 严格控制试剂污染：使用新鲜的试剂，并且避免多次冻融循环。分装试剂至小容器中，避免频繁开启原始试剂瓶。

5. 设置阴性对照：为每个批次的qPCR实验设置阴性对照，包括无模板控制和模板替代物控制，以检测潜在的污染。

6. 采用单向操作：在样品处理和实验过程中，使用单向操作，避免样品和试剂之间的交叉污染。使用专用的管嘴和滴管。

7. 定期清洁和消毒实验器具：定期清洁和消毒实验器具，如PCR工作台、离心机、热循环仪等，以减少污染的风险。

8. 定期验证实验流程：定期验证实验流程和质量控制措施，确保操作规范的执行和实验结果的准确性。

PCR整个实验过程需要进行分区操作，样品准备区、核酸提取区、反应液制备区、pcr扩增区等，这些区域要独立，每一操作步骤都严格按照区室进行，不能混用防止污染。每天要对这些区室进行清洁消毒，并紫外照射，特别是当阳性对照溅撒，环境检测阳性或者仪器污染时，严格按照消毒程序对区室消毒，并验证消毒效果。操作过程中避免手套接触可能被污染的地方，阳性对照最后加入，加后要特别注意枪头不要蹭到其他反应孔。