同一cDNA模板，同一引物，熔解曲线有单峰有双峰？

这可能是由于以下原因：

1. 引物二聚体（primer dimer）：当引物的浓度过高或者PCR条件不合适时，引物可能会相互之间形成二聚体。这些二聚体在熔解曲线分析中可能会显示为一个额外的峰值。

2. 非特异扩增：如果PCR条件不理想或者模板DNA污染，可能会导致非特异扩增，这也可能在熔解曲线分析中表现为一个额外的峰值。

3. 引物或模板的退火温度差异：如果引物或模板有不同的退火温度，可能在熔解曲线分析中产生多个峰值。

至于您提到的问题，同一CDNA模板，同一引物，之前是单峰，但后来出现双峰，这可能是由于引物的存储或操作问题，比如引物可能因为反复冻融或长时间存储而降解，引起非特异扩增。也可能是由于实验室环境的污染，导致模板DNA的污染。

熔解曲线出现双峰，说明你扩增产物或者PCR引物体系中存在二聚体，或发夹结构，导致非特异性产物出现。

那可能是有部分样品有降解才出现了双峰

很可能是酶的问题，换个酶试试看