求助|鼠尾鉴定出现非特异条带怎么办？

如果购买的敲除鼠，那你的引物以及pcr程序都是公司鉴定过给到你的。那么出问题的大概率应该就是pcr试剂或者引物保存问题。

可能引物设计的不好而出现了非特异性条带，重新设计引物

可能有以下几个原因和解决方法：

1. 引物非特异性：引物2可能存在非特异性扩增，导致额外的条带出现。您可以通过以下几种方法来解决：

• 设计新的引物：重新设计特异性更高的引物，确保它们只扩增目标序列。

• 优化PCR条件：尝试不同的退火温度、引物浓度和PCR循环数等参数，以优化特异性和减少非特异性扩增。

2. 引物杂交：引物可能与鼠尾DNA中的非特定序列发生杂交，导致附加的条带出现。为了解决这个问题，您可以尝试以下方法：

• 优化退火温度和延长退火时间：适当调整退火温度和延长退火时间，以增强引物的特异性结合。

• 增加DNA解旋剂：添加DNA解旋剂（如二甲基亚硫酸钠）到PCR反应中，以帮助降低引物与非特定序列的杂交。

3. 引物与其他目标扩增：引物2可能与其他未预期的目标序列发生扩增，导致额外的条带出现。为了解决这个问题，可以尝试以下方法：

• 提取和纯化目标序列：使用特异性的方法，如聚合酶链反应（PCR）或基因克隆，提取和纯化目标序列，以避免非特定序列的扩增。

• 使用其他引物或探针：尝试使用其他引物或探针，以提高特异性并避免非特定扩增。

更换引物吧，可能是引物特异度差导致的