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求助|想去掉质粒上的3bp,用引物进行环形pcr可以p出来吗?

相关实验:致突变 PCR

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ShiningShell

比如质粒上有一段序列是AAAAAAAAAACCCGGGGGGGGGG,我想要的是AAAAAAAAAAGGGGGGGGGG,所以设计一段序列为TTTTTTTTTTCCCCCCCCCC的引物进行PCR,可以P出来去掉CCC的条带吗?

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5 个回答

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是TTT

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不可以删减但是可以突变,如果你只是要研究这个氨基酸的功能,突变更好

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dxy_mqg1dtg8

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不可以,只能是设计两对引物从两端向中间扩增,然后两段拼在一起

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毛利小五郎的徒弟

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不可以,因为无法保证没有重复序列

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loveliufudan

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你想要去除原始质粒序列中的"CCC",你设计的引物序列是"TTTTTTTTTTCCCCCCCCCC"。这看起来不太对,因为引物需要与目标DNA序列具有互补性。在这个例子中,你的引物并没有设计为与你想要去除的部分(“CCC”)互补。这样,PCR的过程并不能成功地去除这个部分。

你需要做的是设计一个新的引物,该引物与你想要扩增的目标DNA序列具有互补性。在这种情况下,你想要的序列是"AAAAAAAAAAGGGGGGGGGG",所以你可能需要设计一个新的引物,这个引物在5'到3'的方向上,与你想要的序列是互补的。

另外,通常情况下,PCR并不能直接用于删除某个序列。PCR主要是用于扩增特定的DNA序列,而不是删除它们。如果你想要删除某个特定的序列,可能需要考虑使用其他的分子生物学技术,如基因编辑技术(如CRISPR-Cas9)或者使用限制性酶切位点进行克隆策略等。

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汤姆卜丽波

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不可能的,pcr是从两头头开始的中间部分肯定有,你可以分开p两段再连接起来

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