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请教。我有一个目的片段大小在210,熔解曲线跑出的tm值达到了93,这个正常么,有人说温度越高,特异性越好,是这样么?

相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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dxy_ud0dpda4


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3 个回答

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juyue2010

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正常,这个与你扩增的目的条带gc含量有关

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土井挞克树

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不是温度越高特异度越好,温度过高破坏了片段结构,特异度就不好了

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loveliufudan

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目的片段大小在210bp,熔解曲线Tm值为93°C是很正常的。一般来说,较长的DNA片段会有较高的熔解温度,因为其含有更多的碱基对,并且在较高的温度下需要更多的热量来解离双链结构。因此,对于210bp的片段来说,其Tm值为93°C并不算太高,但也表明该片段的稳定性很好。

温度越高不一定意味着特异性越好。虽然较高的温度可以提高PCR反应的特异性,但过高的温度也会对反应产生负面影响,如使反应产生非特异性产物或使PCR产物降解。在实际操作中,应根据目标DNA片段的大小、引物的Tm值以及反应体系的特点,选择合适的反应温度来进行PCR反应。通常来说,PCR反应的温度不应太低或太高,以避免不必要的反应产物或降解。

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