引物设计

设计pre-miRNA和pri-miRNA的引物需要注意以下几点：

确定目标序列：首先需要确定目标miRNA的pre-miRNA或pri-miRNA的序列，可以通过基因组浏览器等工具获取。

引物长度：通常选择长度为18-24bp的引物。

Tm值：引物的Tm值需要在50-65摄氏度之间。

特异性：引物需要具有较好的特异性，避免引物与非目标序列的杂交。

引物设计软件：可以使用一些在线或离线的引物设计软件，例如Primer3、OligoCalc等，这些软件可以根据以上要求自动设计引物。

引物设计策略：根据不同的miRNA类型，可以采用不同的引物设计策略。对于pre-miRNA，通常选择在其上下游设计引物，以确保引物能够特异性地放大pre-miRNA序列；对于pri-miRNA，由于其较长，可以选择在序列的两端设计引物，或者选择一些保守的区域进行引物设计。

总之，引物设计需要结合实验的具体情况进行，可以通过试验不同的引物进行优化。

pre-mir 可以直接从mirbase 找到序列，它本身就有个颈环，有80来bp，所以你设计引物的话，就上下各取一段就可以的