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事先没有设计酶切位点,想把4500bp的片段连接T载体,适合吗

相关实验:克隆载体的准备实验

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酒鬼的余额宝

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7 个回答

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genecreate

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可以,片段大难度大一些!!!!

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滴水藏海69

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合适,没有问题的,连t载后再拿t载扩增

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verbalkint

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Gateway或者Gibson重组法都可以在没有酶切位点的情况下把片段连进载体

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dxy_n4jex0k8

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t载体的原理是ta克隆,即使用taq酶做pcr时3'链结尾会带polya,然后与t载体切口处的t互补配对。一般买的试剂盒已经做好了,载量最大多少bp去说明书看看吧,可能5000bp以内吧。

连接t载体时没有用到上面的酶切位点,这种属于入门克隆,差不多的还有拓扑异构克隆。除非你后期想把序列从载体上切下来,不然两端不用加酶切位点。

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unquiet

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片段不是平末端,应该没有问题。

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毛利小五郎的徒弟

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可以用重组质粒转,成功率相对大一些。

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juyue2010

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可以尝试用重组法,插入到载体中

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