克隆载体的准备实验

PCR 技术

最新修订时间：2022-02-10

简介

许多载体及其衍生物被开发出来用于克隆 PCR 产物，其中包括典型的 pBluescript 类载体。它们具有多克隆位点和简化的多克隆位点，PCR-Script Direct 质粒也是这样。简化的多克隆位点允许使用者把常用的限制酶位点整合到 PCR 引物中，同时还避免了相同的目标序列同时出现在质粒载体中的问题。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

来源：丁香实验

操作方法

克隆载体的准备实验

一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂氯仿-异戊醇（24:1) 酚：氯仿-异戊醇（25:24:1) 氯化锂 (LiCl,10mol/L) 酚（Tris-饱和），pH8.0 TE 缓冲液（5 mmol/LTris-HCl、pH8.0，0.1mmol/LEDTA) 乙醇,100% 2. 酶和酶缓冲液碱性磷酸酶（0.1~0.2U)(用于方法 B) 商业上的分子生物学级别的碱性磷酸酶通常