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克隆载体的准备实验

实验分类:

PCR 技术

最新修订时间:

简介

许多载体及其衍生物被开发出来用于克隆 PCR 产物,其中包括典型的 pBluescript 类载体。它们具有多克隆位点和简化的多克隆位点,PCR-Script Direct 质粒也是这样。简化的多克隆位点允许使用者把常用的限制酶位点整合到 PCR 引物中,同时还避免了相同的目标序列同时出现在质粒载体中的问题。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。

来源:丁香实验

操作方法

克隆载体的准备实验

一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂 氯仿-异戊醇(24:1) 酚:氯仿-异戊醇(25:24:1) 氯化锂 (LiCl,10mol/L) 酚(Tris-饱和),pH8.0 TE 缓冲液(5 mmol/LTris-HCl、pH8.0,0.1mmol/LEDTA) 乙醇,100% 2. 酶和酶缓冲液 碱性磷酸酶(0.1~0.2U)(用于方法 B) 商业上的分子生物学级别的碱性磷酸酶通常

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