求助qpcr扩增曲线和熔解曲线问题

老师们，打扰啦，我们实验室跑不了半定量。。但是qpcr出现了以下问题，不知道出错原因在哪儿，还望不吝赐教。
提取的rna A260/280数值正常，逆转录时因不熟悉用量，用了试剂盒允许的最大rna剂量2ug.之后使用原液0.8ul和上下游引物各0.4ul配置20ul体系进行扩增。之前加了ROX是出现了平台期曲线上扬和熔解曲线起始处有峰，不加rox并将steponeplus设置为none之后，出现扩增曲线起点高，熔解曲线也是起点高，下降后出现单峰。今天对原液进行了浓度梯度稀释检测，也是这样的状态。图片如下。还望老师指点解答！