qpcr测蛋白Tm值
dxy_kfnpr5w
用荧光定量PCR做蛋白熔解曲线程序是怎么设定的，我做出来的结果总是向下的抛物线，我的程序是25℃2min，之后就开始收集荧光从25℃到95℃，每次增长1℃，每次停留时间为1min，然后结束收集荧光，再95℃2min.我用的是赛默飞的PikoReal荧光定量PCR。并且我用的染料为蛋白的oranger染料，qpcr里面选择的ROX光源几乎收集不到荧光，请问这个应该怎么去做。
4 个回答
Eason老歌迷
测蛋白Tm值？学习了。加样有没问题，程序因该和普通qpcr一样是相对固定的吧，另外这个机器需要用ROX矫正么，应该一一排除。
whilt-shirt
溶解曲线的程序一般机器默认，其他程序一般是根据试剂说明书设置
bamboopiggy
按照你用的supermix的说明书，来设置melt cuve的程序，然后看你用的染料，你的机器上有激发的通道没有，如果没有，就要换染料。但是一般都是会有的。
你好几和户
Tm值的计算方法：引物为20 mer以下时： Tm = 2℃×(A+T) + 4℃×(G+C) 引物为20 mer以上时：Tm = 81.5 + 0.41×(GC%) - 600/L 其中L为引物的长度。 在PCR反应过程中选择Annealing温度时，一般为 (Tm - 5)℃。
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