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碱基配对不是绝对正确,会有错配的,结合在不同地方,扩增出不同的条带
whilt-shirt
有可能是引物不匹配或者程序有问题
申东熙老伯
可以适当提高退火温度,降低引物浓度,P出两条带是引物特异性差。
Eason老歌迷
两条带,首先引物的问题比较大。设计引物的时候是否是按照跨内含子进行设计的,这样设计的引物一般不会从基因组中P出条带。再就是提取RNA的时候保证纯度,不要有基因组污染。引物温度的问题可以通过做一个梯度温度PCR进行解决,筛选出最佳的温度。如果是前两个问题,那么引物需要重新设计,再就是提取RNA时需要小心一些。
府宅
引物特异性差。 可以利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物
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引物用量偏大,引物的特异性不高。 应调换引物或降低引物的使用量