overlap PCR时有一段序列怎么都连接不成功都有可能是什么原因？
广咣咣1109
使用overlapPCR构建序列时，有一段序列怎么都无法与另外2段序列连接，目前已经尝试了设计更长的overlap序列、调整退火温度等方法。该段序列在使用同源重组构建质粒时相比另外两段序列获得的菌落更少，还有什么方法可以尝试构建该三段序列连接得到的质粒？
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3 个回答
bamboopiggy
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实在不行的话，把另外两段构建好的情况下，用酶切的方法，插入第三段。
天一湖医者
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第一，你的胶放反了，第二就是在加样孔里的极有可能是蛋白或基因组，提取的时候有问题。
Eason老歌迷
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可能是，你的引物没设计好，重叠的部分长度不够好。过长片段的叠加通常都比较困难。PCR体系不够好，导致扩增不好。
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