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菌液PCR全假阳性,咋回事

相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

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嘻哈哈哈321

请教问题:我从真菌中提取DNA,并PCR后进行纯化,纯化产物和007载体连接并转感受态,挑取单克隆摇菌液,并进行菌液PCR,一切正常,然后菌液送测序。可是测序结果返回全是假阳性。不晓得问题出在哪里了,请教各位,谢谢!

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4 个回答

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cab2

有帮助

可以先用cracking液裂解细菌,然后菌液跑胶看质粒大小

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天一湖医者

有帮助

引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行 PCR 扩增时,扩增出的 PCR 产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。

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bamboopiggy

有帮助

可能你的目的片段和你的载体并没有连接到一起,只是转入了大肠杆菌,然后你用插入片段的引物p能p出条带来,你试试用载体的引物p,看看有没有条带

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whilt-shirt

有帮助

有可能是提取DNA过程中出现了污染

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