求大神给分析一下pcr失败的原因
哇哈哈哈321
我用的kod fx酶，扩增的目的基因大小大约9kb左右，按照酶的使用说明书设置的pcr程序，加的各种试剂也是按照说明书来的（没有镁离子），但是跑完胶没有我要的目的基因（引物是找公司设计的），是提的DNA有问题吗？
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4 个回答
dxy_g9y5gije
有帮助
考虑三个方面
第一是DNA，内参基因验证
第二是TM值，设置温度梯度
第三是引物，多试几条引物
挨着验证
天一湖医者
有帮助
模板浓度过低。退火温度过高。有可能，可以做个梯度PCR试一下。循环次数过少或延伸时间过短以致目的基因扩增量不够。这个可能性不大。
bamboopiggy
有帮助
你的dna模板是genomic dna吧？9KB确实有点长，感觉是你的模板太长了，结构复杂，你可以试试多片段克隆然后组合到一起。
灵枢天问
有帮助
有可能是DNA.的问题，你可以跑个胶验证一下大小，看看浓度怎么样，也有可能还是引物的问题
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