qpcr溶解曲线异常

1.看NTC的熔解曲线是不是和目的基因的峰值有差异，如果不同，说明是非特异性扩增。也可以将产物跑电泳看看条带是否大小不同。

2.如果1中熔解曲线相同，可能有气溶胶污染。看一下Ct值差异，如果NTC和目的基因Ct值差10以上，可以分析一下相对表达量。

NTC正常，NRC有Ct值，可能是RNA含有gDNA污染。建议用DNase I消化或使用含有gDNA去除的反转录试剂盒

NTC有扩增，CT在32，需要根据溶解曲线峰值和样品孔峰值对比来判断产物是什么，如果样品孔两个峰，NTC一个峰，且是对应样本孔小峰值位置，那就是引物二聚体，建议降低引物用量或更换引物；如果NTC溶解曲线峰和样本溶解曲线峰完全一致，那就是有DNA污染，建议更换试剂，使用dna污染消除剂擦拭台面，移液器和pcr板等物品，使用带滤芯吸头，整个房间进行紫外灭菌和通风处理。

是不是你的引物不特异？以前用过这个引物么？CT值32 在可以接收的范围内

如果引入没有问题，只能说明模板含量较低，所以Ct值大，它量之间是反比关系。其次你再看看内参Ct怎么样。

一般正常qPCR产物，大小在100-300bp之间，熔解曲线Tm大多在80°C以上，可能是引物二聚体导致，可进一步优化引物。

NTC有扩增，Ct值且＜35，表示反应体系被污染，需要逐步排除污染源。

如果确定不是污染的问题，那么NTC与目的基因的融解曲线峰应该是不重叠的。这种情况一般NTC的Tm值与目的基因的Tm值较低，主要是因为引物二聚体造成。不用管，不影响目的基因Ct值的准确度。