三个复孔的error bar比较长 是什么原因呢

就是比较宽对不对，基本上是加样误差大，

加样过程中操作不够稳，造成的加样误差。误差太大建议重做

1）测量仪器的误差。这个可以较为简单的得到

2）数据分析时的误差

是因为你三个复孔的差异太大了，所以error bar比较长，这样会导致统计学差异可能就没了。

error bar越长，表示组内数据越分散，方差越大～而反之，越短，则表示数据越集中。

1、首先，先排除仪器的干扰，仪器使用时间长的话孔间温度会有略微的变化，而且光路采集也需要确认有无故障，排除之后就要考虑加样的问题。仪器的因素可能性比较小。

2、不建议将模板加入反应液后分装，最后加引物的做法。这样操作是非常不严谨的操作，因为你没有证据证明分装后每个管内的模板量是相同的。但是引物、酶和水的量的要求没有那么精确，所以最保险的做法是将引物、酶、水混匀后分装，最后逐管加模板。试剂的因素基本可以排除，因为你的实验复孔有的正常，有的不正常。而有问题的试剂全都是不正常的。

3、检查一下移液枪（看看每次的质量是不是基本一致），最好定期找厂家或者自己校准（其实就是调调里面的弹簧的弹性系数）

4，可能加样时模板挂壁，建议直接打液至管低然后离心。

5，全部都加样完成后，检查一下复孔之间的反应液的高度以确认加样是否出现问题，普通做实验做的多了可以分辨出5~10微升的差异（通用的0.2ml反应管）。