如何提高荧光定量PCR实验反应的灵敏度与特异性？

这个主要取决于你rna提取的质量和你设计的引物的特异性。只要这两个要点把握住了，realtime的结果就不会差。

1.首先确定模板RNA完整性好,无DNA污染。

2.RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。

3.为了防止模板降解,在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。

4.使用适量的模板RNA,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带太弱。

1、先确定模板RNA完整性好，无DNA污染。

2、RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。

3、为了防止模板降解，在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。

4、使用适量的模板RNA，模板量太多会降低特异性，太少会导致扩增不出条带或条带太弱。

5、若模板中有二级结构，可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。

6、设计引物时，避免在引物3’端含有互补序列，避免形成内部发卡结构。