qpcr出现低置信区间等问题

1.你先确定你rna浓度够不够，逆转的效率如何？

2.你操作过程中，所有东西都加全了？酶，引物，cDNA？

3.你pcr程序是不是有问题？

参比染料设定不正确(MasterMix不加参比染料时，选NONE)。模板的浓度太高或者降解。荧光染料的降解。反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解。

反应条件不够优化：可适当降低退火温度或改为三步扩增法。

反应体系中有PCR反应抑制物：一般是加入模板时所引入，应先把模板适度稀释，再加入反应体系中，减少抑制物的影响。