实时荧光定量试验，是否需要均一化处理？

内参的选择也很重要

RNA测浓度，以相同的投入量（比如50ng）进行反转录，反转录后的cDNA可以进行同等比例的稀释，这样测操作可以确保内参的扩增是齐的，最好在15-20CT之间。因为你做的是相对定量，所以其实即便前面没有归一化处理，也不影响后面相对定量的分析，因为前面RNA和cDNA含量的差异是你的目的基因和内参基因同等比例变化的，所以不会影响相对定量的趋势。相对定量不需要做标准曲线，但是你要是想测一下目的基因和内参基因引物的扩增效率就要做个模板的梯度（一般5个点），如果扩增效率一致在90%-110%那基本上没问题，这是2-ΔΔct统计分析的前提。最后统计方法2-Δct和2-ΔΔct的差异在于你有没有以对照组作为一进行归一化，对你对照组和实验组间的趋势是没有影响的。还有内参的选择确实是需要注意的，如做缺氧就不适合用GAPDH作为内参。（欢迎关注公众号：生物技术控，更多问题可留言）