q-PCR有非特异性条带有没有办法在设计引物的时候提高特异性？
王建勇
我要检测的ｍＲＮＡ在细胞中丰度很低，每次设计的引物做ＰＣＲ的手都有非特异性条带，我用的是染料法ｂｉｏｒａｄ的ｓｓｏｆａｓｔ，不知道有没有方法改善特异性。请大家帮帮忙。
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8 个回答
健坤免疫组化
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现在常用的引物有染料法（sybr green 1）和探针法（taq man探针），taq man探针的特异性非常，但是价格要贵一些，而sybr green 1价格比较便宜，但是会有非特异性扩增，建议试试taq man探针，详细还可参考：http://www.biomart.cn/infosupply/27646868.htm
敬畏OK
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GC含量高，说明解链温度高，目的条带在较高温度才会解链，而在未达到解链温度时，引物会以未完全解链的DNA为模板，进行PCR非特异性扩增，所以易出现非特异性条带。
zhangh111
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可能是引物设计有问题
紫杉醇916
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是不是退火温度太低，所以容易出现非特异性条带。
alaling
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一个尽快提高特异性的方法：用Taqman的探针法……目前来看是最特异的方法了，与其在这耗着不如多花点钱。如果这个方法都不行，干脆放弃吧，方法层面都走不通。
200210lee
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楼主已经是用的real time 了"染料法ｂｉｏｒａｄ的ｓｓｏｆａｓｔ"..... 楼主先确定非特异性产物究竟是什么，什么来源。引物2聚体，基因组扩增的产物还是真正cDNA的非特异产物。引物2聚体，可以调下扩增条件，实在不行换引物就好。基因组污染的话，保证RNA质量，引物设计时注意跨过内含子。其他的换引物吧。
sarinmd
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换real time吧，耗这么多时间不划算
苏格兰白草莓
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如果拿来做一般的PCR都还是有杂带的话，且丰度低，那还是换探针法为好
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