丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

求助 | 质粒保存在-20℃和-80℃会断裂或者消失吗?

相关实验:质粒的制备

user-title

派大星吃吃吃

半年前菌液大提完的一管质粒A分装成两管分别冻存在-20和-80℃,其中-20℃的那管我经常拿出来使用,所以反复冻融比较频繁,最近发现质粒转染的效果不如以前了,我重新送测序和测浓度,发现测序没问题,浓度也没有降低。我就分别从-20和-80都吸出1ug质粒A跑核酸电泳,也拿了同期(半年前)一起大提的其他两种质粒B和C也吸取了1ug做阳性对照(其他两种也冻-20℃,转染效果一直很好),发现不管是反复冻融的-20℃的A还是一直保存在-80℃的A,A条带都比反复冻融的B和C要浅很多,但A B C我都是稀释成1ug/10ul 跑的,请问为什么啊?难道就A质粒容易断裂或者消失吗?

wx-share
分享

4 个回答

user-title

huarenqiang5

有帮助

质粒保存在这两种温度时一般不会出现断裂及消失。

user-title

sswei

有帮助

反复冻融质粒容易降解。尤其是室温较高时,双链DNA也会不稳定。建议分成小管使用,剩余部分冷冻起来,随用随取。

user-title

loveliufudan

有帮助

以下是一些可能导致质粒A转染效果不如以前的原因:

反复冻融:您提到-20°C的A管经常被反复冻融,这可能会导致质粒A的完整性和稳定性受到损害。尤其是如果使用过程中加热时间过长或者温度过高,可能会导致质粒A的损伤更加严重,从而降低转染效果。

长期保存:即使质粒A存放在-80°C的低温环境下,长时间的保存时间也可能会对质粒A的完整性和稳定性造成影响。因此,即使A质粒是保存在-80°C的,也建议尽量缩短存放时间,避免长时间存储。

质粒稳定性:不同的质粒可能具有不同的稳定性,一些质粒可能更容易受到反复冻融、存储时间和其他环境因素的影响,从而导致质粒完整性和稳定性受损。因此,不同质粒之间转染效果的差异可能与质粒自身的特性有关。

质粒纯度:质粒纯度也可能会影响质粒的转染效果。如果质粒A的纯度较低,可能会存在其他杂质分子,影响质粒的稳定性和完整性,从而导致转染效果下降。

user-title

土井挞克树

有帮助

短期内负二十不会,负八十半年内没问题

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序