求助 | 质粒保存在-20℃和-80℃会断裂或者消失吗？
派大星吃吃吃
半年前菌液大提完的一管质粒A分装成两管分别冻存在-20和-80℃，其中-20℃的那管我经常拿出来使用，所以反复冻融比较频繁，最近发现质粒转染的效果不如以前了，我重新送测序和测浓度，发现测序没问题，浓度也没有降低。我就分别从-20和-80都吸出1ug质粒A跑核酸电泳，也拿了同期（半年前）一起大提的其他两种质粒B和C也吸取了1ug做阳性对照（其他两种也冻-20℃，转染效果一直很好），发现不管是反复冻融的-20℃的A还是一直保存在-80℃的A，A条带都比反复冻融的B和C要浅很多，但A B C我都是稀释成1ug/10ul 跑的，请问为什么啊？难道就A质粒容易断裂或者消失吗？
4 个回答
huarenqiang5
质粒保存在这两种温度时一般不会出现断裂及消失。
sswei
反复冻融质粒容易降解。尤其是室温较高时，双链DNA也会不稳定。建议分成小管使用，剩余部分冷冻起来，随用随取。
loveliufudan
以下是一些可能导致质粒A转染效果不如以前的原因：
反复冻融：您提到-20°C的A管经常被反复冻融，这可能会导致质粒A的完整性和稳定性受到损害。尤其是如果使用过程中加热时间过长或者温度过高，可能会导致质粒A的损伤更加严重，从而降低转染效果。
长期保存：即使质粒A存放在-80°C的低温环境下，长时间的保存时间也可能会对质粒A的完整性和稳定性造成影响。因此，即使A质粒是保存在-80°C的，也建议尽量缩短存放时间，避免长时间存储。
质粒稳定性：不同的质粒可能具有不同的稳定性，一些质粒可能更容易受到反复冻融、存储时间和其他环境因素的影响，从而导致质粒完整性和稳定性受损。因此，不同质粒之间转染效果的差异可能与质粒自身的特性有关。
质粒纯度：质粒纯度也可能会影响质粒的转染效果。如果质粒A的纯度较低，可能会存在其他杂质分子，影响质粒的稳定性和完整性，从而导致转染效果下降。
毛利小五郎的徒弟
短期内负二十不会，负八十半年内没问题
