Elaine_npxa
在进行PCR扩增时,前期所跑出来的条带单一且很亮,但跑着跑着就会开始亮度减弱亦或是跑不出来、条带很多,请问这是什么原因呢?后期跑不出来的时候已经将模板更换过也是跑不出来。
loveliufudan
最可能的原因可能是模板DNA降解或消失。这可能是由于DNA质量不佳、PCR反应体系中存在抑制因素、PCR反应过程中的外界环境因素(例如温度、时间等)等因素导致的。建议您对实验过程中的样品和反应条件进行全面的评估,包括DNA质量、PCR反应体系的组成和浓度、PCR反应的温度和时间等方面。此外,如果样品存在污染,可能也会影响PCR反应的效果,因此也要注意样品的纯度和质量。最好对PCR产物进行测序确认,以了解扩增产物的准确性和特异性。
土井挞克树
考虑是引物不合适的原因,建议更换特异性高的引物。新引物可以多设几个梯度(4~5个)扩增,可以得到好一些的结果。
sswei
1:模板DNA不行,纯度不够或者量太少,建议做下OD260/OD280分析,看看纯度与浓度。
2:设计的引物对你的其它样品的特异性不够,导致条带的模糊
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