长片段基因的扩增如何选择引物

引物设计没办法避开中间序列的错配或者突变，只能设计尽量好结合、相对特异的引物序列，使用高保真pcr酶可以降低突变概率

在引物设计阶段，可以考虑以下几点：

• 引物长度一般为15-27 bp，最适为18-22 bp。
• 引物的GC含量应该在40%-60%之间，且应该避免出现连续的GC或AT。
• 引物的Tm值应该相同，且应该在55℃-65℃之间。
• 引物的3’端应该避免出现连续的G或C，以避免形成二聚体。
• 引物的5’端应该避免出现连续的A或T，以避免形成非特异性扩增产物。
• 引物的特异性可以通过BLAST等工具进行检验。