大肠杆菌同源重组基因敲除筛选失败

在这种情况下，你可以考虑以下几个建议：

更换抗性基因：如果你的双抗筛选方法失败，可以尝试更换抗性基因，例如使用chloramphenicol、tetracycline等抗生素进行筛选。这些抗生素与kanamycin和gentamicin不同，可能对你的敲除菌株具有更高的选择性。

采用CRISPR/Cas9等技术：CRISPR/Cas9是一种现代分子生物学技术，可以精确剪切目标基因，并插入自定义DNA序列。通过CRISPR/Cas9技术，你可以更有效地敲除基因，从而避免筛选失败的情况。同时，该技术也具有高效和可重复的优点。

结合其他方法进行筛选：除了双抗法和CRISPR/Cas9技术，你还可以结合其他筛选方法，例如PCR检测、序列分析、Southern blotting等。这些方法可以帮助你确定敲除成功的细胞克隆，并最大限度地避免假阳性菌落的产生。

如果双抗都是经过验证的话下一步建议换个抗性或者换其他的敲除方法，可以提高成功率，这个时候不建议更换抗体