EMSA实验中单独分析标记DNA可见条带（DNA已标记biotin），但1.5u g纯化蛋白和探针标记的DAN混合后上样无带

这可能是由于以下原因之一导致的：

可能存在过多的非特异性结合蛋白或污染物，导致特异性带的信号被掩盖或者丧失。这种情况下，我们建议优化实验条件，如调整反应温度、缓冲液组成、盐浓度、探针和蛋白的比例等，以最大限度地减少非特异性结合。

没有充分优化 EMSA 实验条件，导致探针和蛋白的结合比例过低，无法形成特异性带。在这种情况下，建议尝试优化 EMSA 实验条件，以最大限度地增强探针和蛋白之间的结合，例如调整反应温度、缓冲液组成、盐浓度、探针和蛋白的比例等。

可能是在转膜过程中出现了问题，导致标记的 DNA 没有成功转移到膜上，从而无法与蛋白结合。在这种情况下，建议仔细检查转膜的条件是否正确，并考虑优化转膜条件。

可能存在 DNA 质量或浓度的问题，导致标记的 DNA 无法与蛋白结合。在这种情况下，可以使用其他方法检测 DNA 的质量和浓度，如琼脂糖凝胶电泳和比色法等。