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【求助】一直做不出噬菌斑是什么原因?

相关实验:噬菌体克隆的纯化实验

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Agan9N1E

最近课题组开展了噬菌体相关的研究,才开始就遇到问题了。宿主菌是铜绿假单胞菌,用同一株菌加噬菌体在液体培养基中培养过夜后,培养基还是比较澄清的,我认为噬菌体对株菌应该是有效的。然后我把宿主菌到双层板,然后将噬菌体滴到上层后,能够形成空斑图(1)。然后将宿主菌100μL和噬菌体100μL混合后到双层板怎样都长不出噬菌斑。我以为是比例的问题,但是提高宿主菌的比例或浓度,分别将噬菌体或宿主菌梯度稀释,改变混合孵育的时间5min-20min,降低到上层培养基的温度,怎么改变条件都长不出明显的噬菌斑图(2-6)。只能看见很浅的很不明显的斑图(7),这是什么原因呀?谁能给我个思路不?

ps几个月之前做过一次,同一个噬菌体,宿主记不清用的什么了,能长出很明显的噬菌斑图(8,9)。

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3 个回答

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sswei

有帮助

不长的可能原因:1.接种量太小;2.培养基方面的,如培养基成分是否配制正确,pH是否正确等.

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

考虑宿主菌的浓度还是太少了。建议增高宿主菌浓度。

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loveliufudan

有帮助

以下是一些可能导致这种情况的原因和建议:

噬菌体和宿主菌之间可能存在耐药性或抗性。在您之前的实验中可能使用了不同的宿主菌,而这次使用的宿主菌可能已经产生了抗性,使得噬菌体无法感染。

建议:请确保您使用的宿主菌和噬菌体是匹配的,并且对噬菌体没有耐药性或抗性。您可以通过序列分析和药敏实验来确定宿主菌的抗性情况,并检查噬菌体的灵敏度。

您的混合物可能不均匀。即使您已经按比例混合了噬菌体和宿主菌,混合物中可能存在不均匀的区域,从而导致噬菌体无法感染宿主菌。

建议:请确保在混合噬菌体和宿主菌之前彻底混匀培养基,您可以尝试使用不同的混合方式(例如,通过轻轻混合或振荡)来确保混合物是均匀的。

噬菌体和宿主菌的密度可能太低。即使您使用了匹配的宿主菌和噬菌体,如果它们的密度太低,噬菌体也无法感染宿主菌。

建议:尝试增加宿主菌和/或噬菌体的密度,并确保它们在混合之前已经充分生长和达到足够的浓度。

孵育时间可能太短或太长。如果您的孵育时间太短,噬菌体可能没有足够的时间感染宿主菌;如果时间太长,噬菌体可能已经失去了活性。

建议:尝试调整孵育时间并观察噬菌斑的形成情况。您可以尝试使用不同的孵育时间来确定最佳的感染时间。



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