【求助】一直做不出噬菌斑是什么原因？
Agan9N1E
最近课题组开展了噬菌体相关的研究，才开始就遇到问题了。宿主菌是铜绿假单胞菌，用同一株菌加噬菌体在液体培养基中培养过夜后，培养基还是比较澄清的，我认为噬菌体对株菌应该是有效的。然后我把宿主菌到双层板，然后将噬菌体滴到上层后，能够形成空斑图(1)。然后将宿主菌100μL和噬菌体100μL混合后到双层板怎样都长不出噬菌斑。我以为是比例的问题，但是提高宿主菌的比例或浓度，分别将噬菌体或宿主菌梯度稀释，改变混合孵育的时间5min-20min，降低到上层培养基的温度，怎么改变条件都长不出明显的噬菌斑图(2-6)。只能看见很浅的很不明显的斑图(7)，这是什么原因呀？谁能给我个思路不？
ps几个月之前做过一次，同一个噬菌体，宿主记不清用的什么了，能长出很明显的噬菌斑图(8，9)。
3 个回答
sswei
不长的可能原因:1.接种量太小;2.培养基方面的,如培养基成分是否配制正确,pH是否正确等.
毛利小五郎的徒弟
考虑宿主菌的浓度还是太少了。建议增高宿主菌浓度。
loveliufudan
以下是一些可能导致这种情况的原因和建议：
噬菌体和宿主菌之间可能存在耐药性或抗性。在您之前的实验中可能使用了不同的宿主菌，而这次使用的宿主菌可能已经产生了抗性，使得噬菌体无法感染。
建议：请确保您使用的宿主菌和噬菌体是匹配的，并且对噬菌体没有耐药性或抗性。您可以通过序列分析和药敏实验来确定宿主菌的抗性情况，并检查噬菌体的灵敏度。
您的混合物可能不均匀。即使您已经按比例混合了噬菌体和宿主菌，混合物中可能存在不均匀的区域，从而导致噬菌体无法感染宿主菌。
建议：请确保在混合噬菌体和宿主菌之前彻底混匀培养基，您可以尝试使用不同的混合方式（例如，通过轻轻混合或振荡）来确保混合物是均匀的。
噬菌体和宿主菌的密度可能太低。即使您使用了匹配的宿主菌和噬菌体，如果它们的密度太低，噬菌体也无法感染宿主菌。
建议：尝试增加宿主菌和/或噬菌体的密度，并确保它们在混合之前已经充分生长和达到足够的浓度。
孵育时间可能太短或太长。如果您的孵育时间太短，噬菌体可能没有足够的时间感染宿主菌；如果时间太长，噬菌体可能已经失去了活性。
建议：尝试调整孵育时间并观察噬菌斑的形成情况。您可以尝试使用不同的孵育时间来确定最佳的感染时间。
