求助！！双荧光素酶检测海肾荧光素酶值低！！求求！！
dxy_mw5zyqyr
是这样的，我用的双荧光素酶载体分别是pGL6,pRL-SV40,然后我的空白组是只有细胞，对照组是pGL6+pRL-SV40,实验组是在pGL6载体上连接了我的目的启动子+pRL-SV40，下面是我测的值，萤火虫荧光素酶看起来还正常，实验组是有萤火虫荧光素酶表达的。
但是！海肾荧光素酶的值很奇怪！对照组的海肾荧光素酶值我觉得算正常，说明pRL-SV40转到细胞里了，但是！实验组的海肾荧光素酶值跟空白差不多，跟没转进去一样，怎么会呢，都是一样的量，一样的操作。
对照组和实验组唯一的区别就是我的启动子，难道是启动子的交互作用，影响了海肾的表达？我之前按5：1的比例转染，对此，我又进行了10：1，20：1，40：1进行转染，发现实验组的海肾值依旧接近空白，我实在是找不到原因了，特来寻求帮助。
球球各路朋友们看一下，帮我分析一下，特别感谢！！
3 个回答
初秋丶NI0Q
求助！！ 我也是在敲低和NC组中转染TOP/FOP质粒、海肾的荧光值只有几千，而TOP和FOP都是几千万。 已经是TOP:海肾RLUc的质粒比1：10了
loveliufudan
根据你提供的数据，萤火虫荧光素酶的表达看起来是正常的，因此可以排除萤火虫荧光素酶的问题。而海肾荧光素酶的表达在实验组中非常低，与空白组相似，可能存在以下几种可能性：
转染效率不足：你已经尝试了不同的载体比例和浓度，但如果转染效率低，可以使用正常化对内参进行校正，或者使用其他方法提高转染效率，如电穿孔或磁转染等。
启动子不活性或与报告基因不兼容：你使用的启动子可能不活性，或者与报告基因不兼容，导致无法正常表达。你可以尝试在其他载体中测试启动子活性，或使用其他报告基因进行验证。
干扰素反应：如果你的启动子会诱导细胞产生干扰素反应，则可能会抑制海肾荧光素酶的表达。你可以使用抗干扰素的方法进行验证。
毛利小五郎的徒弟
重新构建启动子，考虑是启动子构建失败
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