质粒电转到毕赤酵母感受态后，涂板，长出菌后，做菌落pcr怎么做

可以尝试用快速菌落PCR的方法来提取和扩增酵母菌的质粒DNA。具体步骤如下：

用菌落PCR提取酵母菌的质粒DNA，具体步骤如下：

选取酵母菌菌落，用无菌的PCR管刮下一小块菌落。

加入10-20 μL TE缓冲液（pH8.0）或蒸馏水，用微量吸管或者细管破碎菌落。

加入 1 μL 蛋白酶K，37℃ 孵育5-10 分钟。注意不要过度消化。

将管子放入100℃的水浴中，热搅拌10分钟使细胞裂解，然后放到冰上冷却1-2分钟。

离心3-5分钟，收集上清液。

用上清液作为PCR反应的DNA模板，进行PCR扩增。

菌落PCR反应条件：

模板：上述提取的上清液

引物浓度：0.5 μM

Taq聚合酶浓度：2.5 U/25 μL

反应体系：10× Taq缓冲液、2.5 mM dNTPs、MgCl2、模板、引物和Taq聚合酶

反应体积：25 μL

PCR程序：95℃预变性5分钟，35-40个循环（95℃变性30秒、55℃退火30秒、72℃延伸1-2分钟），72℃最后延伸10分钟。

扩增产物可以进行琼脂糖凝胶电泳检测，如果有特异性条带，则可用提取基因的方法纯化扩增产物进行测序。

需要注意的是，这种方法提取的DNA纯度和质量可能不如商用试剂盒提取的好，因此需要进行PCR反应前进行一定程度的质检。此外，使用不同菌株的时候，有些酵母菌可能需要更长的PCR扩增时间才能够扩增出特异性产物，需要根据实验情况进行调整。

可以先把菌落裂解开，然后把dna提取出来