做重组蛋白，构建质粒（无his-tag）

通过设计引物，添加his-tag，克隆到质粒中去。

在构建质粒时，如果没有在目的基因的C端加入His-tag，而已经加上了终止子，则无法通过常规克隆方法来加入His-tag。但是，可以通过合成基因的方式来加入His-tag。

合成基因的方法可以利用化学合成技术来生成需要的DNA序列。一般而言，商业合成基因服务提供商可以为您合成包含His-tag的目的基因序列，并在DNA序列的末端添加正确的限制酶切位点，以便您可以将合成的基因克隆到质粒中。

另外，如果您已经构建了缺少His-tag的质粒，并且想要通过合成基因来添加His-tag，可以使用PCR引物来扩增目的基因的C端，并在引物中添加His-tag序列，然后将扩增产物克隆到您的质粒中。需要注意的是，这种方法需要仔细设计引物，以确保扩增产物具有正确的长度和序列，并且添加的His-tag序列与目的基因C端的氨基酸序列相容。

可以通过合成基因的方式后续添加，注意好定位就好了。