EMSA中蛋白可以用包涵体获得吗？

VPN会哦路

2023-01-02

想请教下大家，我现在研究一个植物的转录因子，想做它的蛋白互作。我在pET32a载体中插入我的目的片段，构建重组蛋白，大小70KDa左右。诱导表达后，沉淀比上清多，试了各种条件进行优化，还是以包涵体形式居多。所以我就用包涵体进行变性，纯化，再复性。用的8M尿素变性，过镍株纯化，然后用不同浓度的尿素进行透析复性，那最后，我怎么确定重组蛋白是否复性成功呢？还有就是用包涵体获得的蛋白能用来做EMSA实验吗？谢谢！

3 个回答

清清冷风

2023-01-04

有帮助

我觉得这个应该不可以吧，包涵体蛋白处于Unfolded状态，和核酸结合的话，如果有，也是nonspecific的吧。所以答案是否定的。

huarenqiang5

2023-01-04

有帮助

不可以，包涵体蛋白处于Unfolded状态，和核酸结合的话，如果有，也是nonspecific的。

毛利小五郎的徒弟

2023-01-02

有帮助

EMSA中蛋白可以用包涵体获得。