pDONR221质粒酶切不完全求助

请同行帮忙指点一下，我实在不知道问题出在哪里了？

利用gateway重组方法，通过BP反应得到了质粒pDONR221-X，测序无误。为接下来做LR反应，将pDONR221-X用Mlu I内切酶进行酶切，获得线性pDONR221。

酶切产物跑胶时，目的条带处老是弥散，纯化后，再跑胶还是有质粒的条带。

增加内切酶的用量，延长酶切时间，减少质粒用量都试过了，但就是有未切开的质粒。

不知道有无同行也遇到此类的问题，求赐教。

此胶图为Mlu I酶切后的结果