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同源重组构载,抗性板上长的菌很少,而且都是假阳性菌

相关实验:质粒的制备

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dxy_oeu11rar

不同的载体都没有阳性菌,而且抗性板上的菌只有个位数,检查了载体没有自连,还可能是什么原因导致问题出现呢

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4 个回答

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bamboopiggy

有帮助

看一下,你插入片段的引物有没有问题?感觉是没有同源重组上去。或者是看一下你酶切载体的酶有没有问题。

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天一湖医者

有帮助

应该是连接比例,或者载体酶切不彻底,目的片段等的问题,如果担心是自连状况,建议增加一个连接体系中只加载体、不加目的片段的对照,排除自连的问题

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balalaLy

有帮助

有可能感受态活性或者量不够,造成克隆数少。

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未来9

有帮助

可能问题在于整合率非常低,加大细胞数,比如6块6厘米盘进行转染,获得更多的克隆再从中间选真克隆。

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