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琼脂糖凝胶电泳冰上进行是不是可以防止电泳缓冲液过热导致的条带拖尾?

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alirgnahs

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5 个回答

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迟C迟

有帮助

琼脂糖凝胶电泳没必要在冰上进行,只要样品没问题,没降解没污染,一般条带也不会拖尾。

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Keven轩

有帮助

可以,但是一般没有这个必要,不然会很浪费冰的

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Guoood

有帮助

电泳时在冰上确实可以起到一定降温作用,但条带拖尾还可能与配的琼脂糖凝胶的好坏及电泳液PH有关,最好胶和电泳液都用新鲜配制的

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bamboopiggy

有帮助

是,如果电流过大,会产生大量的热,让胶溶解变形,从而使条带改变

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天一湖医者

有帮助

条带拖尾原因有以下:

1、 可以考虑是不是样品不纯,目的产物与杂带相差不大,所以要多跑一段时间才有尾巴。参考marker,marker应该不会有。如果有的话说明配胶有问题。

2 、琼脂糖检测DNA一般去1~5微升原液,加2微升溴酚蓝便可,注意上样浓度;

3、可能是原液浓度太大造成的;

4、可能DNA已降解。

5、在提取前对样品进行一定的脱腐处理呀。很简单。有一种TENP buffer,文献中查的到的。

6、 DNA降解避免核酸酶污染。

7、 DNA上样量过多,可以减少凝胶中DNA上样量。

8、 所用电泳条件不合适,可以将电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃,巨大DNA链,温度应 <15℃,核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。

9、 DNA样含盐过高,可以在电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。

10、 有蛋白污染,可以采用电泳前酚抽提去除蛋白。

11、 DNA变性,电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA

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