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核酸斑点杂交,样品点在铅笔同侧还是另外一侧

相关实验:痘苗 DNA 检测实验

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dxy_4b099u02

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2 个回答

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一个小哭包

有帮助

应该是在哪一侧应该都可以,不影响实验

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天一湖医者

有帮助

这个一般没有要求吧?  

(1) 10μl样品与20μl 100%甲酰胺、 7μl 37%甲醛、2μl 20×SSC混合。混合置于68℃,15分钟后置冰浴中。

  (2) 用0.1mol/L NaOH清洗点样器,再用无菌水充分冲洗。将一张经20×SSC浸润的滤纸铺在点样器上,上面再铺上一张经20×SSC浸润1小时的硝酸纤维素滤膜,加盖并夹紧,接通真空泵。

  (3) 用10×SSC清洗各样孔。在每一样品中加两倍体积的2×SSC,混合后加样于孔中。外围几个孔中加2μl染料定位,缓慢抽吸。每孔用1ml 10×SSC清洗两次。继续抽吸5分钟,吸干滤膜。

  (4) 取出滤膜,夹在两张滤纸中间, 80℃真空烘干2小时。按上述Southern或Norhtern杂交所述的方法与放射性标记探针杂交。

  [注意]

  1、在放射自显影时应注意滤膜必须干燥,并覆盖上保鲜膜,否则,滤膜将与X-光片粘在一起,使以后的操作困难。

  2、在杂交过程中,整个滤膜应一直是湿润的,不得干涸。

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