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如何确定原核表达出来的蛋白质是我想要的蛋白呢?

相关实验:质粒构建技术

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PunctualUW1U

本人使用pET28a构建重组载体,表达出来的蛋白大小和预期不一样,如何确定该蛋白是我想要的蛋白呢?

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3 个回答

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bamboopiggy

有帮助

用你目的蛋白的抗体,跑个wb不就可以了吗?

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dxy_gwrp7ndq

有帮助

注意事项:

1,是否注意基因来源,密码子是否优化过

2,蛋白胶毕竟只是定性,建议做个western验证下

3,优化一下诱导条件,

4,换一个表达载体试试

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府宅

有帮助

对蛋白序列进行分子量估计,选择适当的MAKER进行跑SDS-PAGE。分别取少量样品加入SDS缓冲液煮沸10min,离心跑胶,确定蛋白表达情况之后可以扩大培养

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