EMSA实验为什么shift有两条带

1）曝光或者成像时间过长。

2）封闭时间不足或者效率不高。

3）洗涤效果不佳。

4）实验过程中膜没有一直处于湿润状态。

阳性出来了说明EMSA过程本身没问题。你探针用量是多少，感觉自由探针信号不太强？也可能是核蛋白的活性不行，试试pierce的78833提蛋白，或者找一个确定可以和你提的核蛋白中某个转录因子反应的探针做阳性，验证你的核蛋白活性，也就是单单泳道1的对照还不够

可能是产生了非特异性反应，要尽量使用纯化的抗体。