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一、荧光素酶报告基因的检测原理荧光素酶（Luciferase）是生物体内催化荧光素(luciferin)或脂肪醛(firefly aldehyde)氧化发光的一类酶的总称，来自于自然界能够发光的生物。自然界存在的荧光素酶来自萤火虫、发光细菌、发光海星、发光节虫、发光鱼、发光甲虫等。细菌荧光素酶对热敏感，因此在哺乳细胞的应用中受到限制。目前，以北美萤火虫虫(Photinus pyralis)来源的荧光素酶基因应用的最为广泛，该 ...

胎牛血清是细胞培养常用的添加物， 目前享有盛誉的Life等国际品牌的最好胎牛血清价格飞涨，500ML从原来的3000-4000元涨到现在7000-8000元，给很多科研单位或机构造成了巨大的压力，不管是科研单位还是经销商都费劲心机储备高质量的国际进口血清。然而前期储备的较低价格的进口血清总有用完的一天， 因此国内相关单位非常关注寻求新型的细胞培养基。 但并不是所有的细胞培养需要最高质量的胎牛血清， 而且市场上有些培养基完全 ...

实验材料•BSA（1 mg/ml），0.05 g的BSA(Sigma-Aldrich Ltd.)溶于50ml ddH2O中，每Eppendorf管约加入1ml溶液，并在-20℃下冷冻。•预染色marker (Bio-Rad)•ProMarker(Wealtec)•两套玻璃板与校正卡，厚玻璃板与U形玻璃板，0.75 mm厚胶条和一个0.75 mm 10齿梳（Wealtec）•浓度为12％的SDS-PAGE分离胶（0.75 mm）;2.31 ml ddH2O，2.8 ml浓度为30％的 ...

Meta分析的完整步骤，根据个人的体会，结合战友的经验总结而成，meta的精髓就是对文献的二次加工和定量合成，所以这个总结也算是对战友经验的meta分析吧。一、选题和立题（一）形成需要解决的临床问题：系统评价可以解决下列临床问题:1.病因学和危险因素研究;2.治疗手段的有效性研究;3.诊断方法评价;4.预后估计;5.病人费用和效益分析等。进行系统评价的最初阶段就应对要解决的问题进行精确描述,包括人群类型(疾病确切分型、 ...

国内比较注重论文数量，一些研究生读博士的时候就能发表不少论文。我在国内读博士的时候也发表不少论文，来新加坡国立大学后，发现他们的评价标准是他引次数除以论文数量，如果别人不引用，论文数越多平均他引次数反而更小，所以很少有人片面追求数量。这里结合自己的一些经验，讲述一下写出高水平论文的一些建议，相信对正苦于如何发表SCI论文的博士们是有借鉴价值的。1. 研究方向要在自己擅长的领域选择，或者有擅长该方向的人指导选择研究 ...

杨晓芳 张英（新疆昌吉州人民医院检验科　新疆昌吉　831100） 【关键词】ELISA法孵育时间丙肝抗体假阳性 酶联免疫吸附试验(ELISA)，以其操作简便、快速、灵敏度高、特异性好之特点。被广泛应用于临床诊断，是目前检验科用于各类传染病指标大批量标本检测的主要方法，也是丙肝抗体常用的检测方法，但由于酶联免疫吸附试验(ELISA)，在检测过程中影响因素诸多，会出现假阳性反应，现将ELISA两步法由于孵育时间不同，而导致假阳性结果报道如下： 1　 ...

1. 实验动物产蛋期母鸡（动物实验中心购买），普通饲料喂养，自由进食进饮；实验前禁食12h2.主要试剂及仪器EDTA-2Na购自国药集团化学试剂有限公司；双抗购自Hyclone公司；M199培养基、胎牛血清及Ⅱ型胶原酶均购自美国Gibico公司；CO2恒温培养箱购自美国Thermo公司3.实验步骤A. 翅下静脉注射2mL EDTA-2Na（W/V，2%）溶液处死母鸡，新洁尔灭消毒液浸泡消毒5min，打开腹腔，剪取整个卵巢，小心剥离卵泡 ...

由于环境及人们生活方式的改变，不孕不育患者在人群中的比例大幅升高，不孕不育症将成为继肿瘤和心血管疾病之后的第三大疾病。目前，全世界约10%-15%的夫妇罹患不育症，其中，男性不育因素占50%，引起男性不育的原因有很多，因遗传缺陷导致的不育约占男性不育的30%。导致男性遗传学异常的原因主要有Y染色体微缺失、染色体结构和数目异常、基因突变等。在精子发生障碍引起的男性不育患者中，Y 染色体微缺失的发生率仅次于Klinefel ...

1.区分生物学重复与技术重复生物学重复：指样本重复，比如3只小鼠，同时做一种处理，就是三个生物学重复。技术重复：一般是三次实验，比如对一块组织，提了三次RNA，做三次realtime。2.设置生物学重复的意义由于新一代测序技术的优越性以及高成本，曾一度忽略了“生物学重复”的重要性。但生物学重复对于测序实验的设计以及实验数据的解读和分析都非常重要。设置生物学重复：能够消除组内误差：生物学重复可以测量变异程度增强结果的 ...

怎么从组织中提取RNA1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。 注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。如果一次做多个标本的RNA提取 ...

1、实验器材（从左到右）：第一行：干棉球、酒精棉球、10％水合氯醛＋注射器、碘伏＋棉签第二行：三种不同粗细的鱼线（鱼线最好在2.0、2.5mm处各用记号笔作好标记，便于观察进入距离）、弯盘内为手术器材第三行：记号笔、自制拉钩（皮筋+曲别针＋大头针）2、麻醉：可用饮料瓶自制捕鼠器（适用于不敢手抓大鼠的），用于打麻药，根据大鼠的重量选择不同粗细的饮料瓶（太粗了大鼠可在瓶中回头）。效果图3、麻倒后绑在手术台上4、剪去颈前的鼠毛，碘伏消毒。5 ...

Dietary supplementation with n-3 polyunsaturated fatty acids and vitamin E after myocardial infarction: results of the GISSI-Prevenzione trial--THE LANCET • Vol 354 • August 7, 1999影响因子：39.06引言为什么常食用鱼类脂肪的爱斯基摩人群中爆发冠心病的风险较低？意大利心肌梗死生存研究小组（GISSI-P）在长达3.5年的研究后找 ...

自从1976年，卡氏滴定法已经成为石油协会认可的石油产品中水分含量的标准测试方法，1982年成为日本工业标准。这种方法可用于库伦及容量滴定系统。由于石油产品中水分是微量定量分析，库伦法得到广泛应用。库仑法是把样品，如绝缘油、冷冻机油、变压器油，煤油或者柴油加入电解液中。对于容量法，样品溶解在油类专用的脱水溶剂中，用KF滴定剂直接滴定。硅油样品被加到酮类脱水溶剂中后可被直接滴定。石油产品中的一些添加剂，如抗氧化剂， ...

细胞凋亡（英语：apoptosis，源自希腊语：απόπτωσις，有堕落，死亡之意），为一种细胞程序性死亡。相对于细胞坏死（necrosis），细胞凋亡是细胞主动实施的。细胞凋亡一般由生理或病理性因素引起。而细胞坏死则主要为缺氧造成，两者可以很容易通过观察区分开来。在细胞凋亡过程中，细胞缩小，DNA被核酸内切酶降解成180bp-200bp片段属于有层次之断裂，（可以通过凝胶电泳证明），而细胞坏死时，细胞肿胀，细胞膜被破坏 ...

TFAR19（PDCD5）是由本研究室在国际上首先报导的一个拥有自己知识产权的人类新基因，前期的功能研究表明，它是促进细胞凋亡的增强剂。利用荧光素（FITC）标记的TFAR19单克隆抗体为探针，对细胞凋亡过程中TFAR19蛋白的表达水平及定位研究发现，凋亡早期TFAR19表达水平增高并出现快速核转位现象，伴随着细胞核形态学的变化，持续较长时间，在凋亡小体中仍然可见。同时我们发现，凋亡早期TFAR19蛋白的核转位 ...

生物碱是天然中药材中分量很重的一类活性成分，目前用于分离纯化这一类物质的功能填料市场上还没研究出一种有效的分离纯化生物碱的高效填料，所以对于这一类物质的分离都是用的常规的方法。本司对生物碱这一类物质的分离利用常规方法，总结了一些技巧，获得生物碱的收率高，纯度也比较好。以去甲异波尔定这个生物碱为例，去甲异波尔定属于异喹啉生物碱，按照常规的分离生物碱的方法是，先对药材进行提取、浓缩，然后利用乙酸乙酯或者二氯甲烷进 ...

癌症是不可预测的。肿瘤在初次治疗后缩小，但之后可能变得更加可怕。这种疾病可能扩散，也可能突变，而遗传改变使得癌症对治疗方案更加敏感，或恰恰相反。 肿瘤学家通常依赖侵入性的活组织检查和非侵入性的成像手段来追踪肿瘤的大小、扩增以及对治疗的响应。然而，循环肿瘤细胞（CTC）带来了一种前途光明的新方法。在此，我们回顾一下分离和研究这些肿瘤风向标的方法。 CTC定义 循环肿瘤细胞是指从肿瘤上脱落并进入循环系统的癌细胞，在那里它们可以通 ...

Meta分析的选题是一个很重要的问题。选题不当，容易导致研究缺乏价值、研究困难或无法完成。其注意事项如下：1. 重要性只有具有比较重要的临床意义的问题才适合作meta分析。Meta分析并不是一件很简单的事情，写一篇高质量的至少也要两个月以上的时间。如果分析的问题无关紧要，则得不偿失，也难以发表。2. 争议性一般而言，具有争议性的问题最适合做meta分析。通过汇总多个研究结果，得到总的更可靠的结论。怎样才知道哪些具有争议性呢 ...

器材：充裕版：通风橱、手术剪、小止血钳、眼科镊、眼科剪、小咬骨钳、手术刀柄及刀片简易版：手术剪、小止血钳、眼科镊、眼科剪（这次操作用的这套东西）1. 剥离颅骨及脊柱周围的肌肉2. 由脊髓下段的缺口开始咬开并去除椎板3. 暴露出整个脊髓背侧4. 眼科剪剪开脊髓周围的脊膜及背根节，剥离出脊髓5. 同上6. 剪去残余的椎骨7. 由枕骨大孔处入路掀开咬除颅骨8. 继续9. 继续10. 暴露嗅球11. 咬除侧面的骨板，清理小脑绒球周围的组织，剥离出绒球12. 清理小脑绒球周围的组织 ...