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如何让支原体滚远点

据统计,大约三分之一的细胞培养物都感染了支原体!这些小东西神不知鬼不觉,侵入你的细胞。支原体大小一般在0.3-0.5um之间,最突出的结构特征是没有细胞壁,对作用于细胞壁生物合成的抗生素不敏感。研究表明,支原体能耗尽营养物,促进代谢积累,导致pH改变,对细胞造成多种影响,包括生长状况、生化特性、代谢、免疫、以及细胞存活等多方面的改变,继而干扰实验结果,或造成无法解释的差异。更加不幸的是拯救被感染的细胞几乎是不可能的。因此 ...

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你的细胞受到支原体污染了么?

细胞培养被支原体污染是个世界性问题,在细胞培养中支原体感染发生率达到63%。支原体是一类无细胞壁,形态呈高度多形性,为圆形、丝状或梨形,其直径仅有0.13~0.18μm,变形能力大,故能通过滤菌器,最突出的结构特征是没有细胞壁,对作用于细胞壁生物合成的抗生素不敏感。研究表明,支原体能耗尽营养物,促进代谢积累,导致pH改变,对细胞造成多种影响,包括生长状况、生化特性、代谢、免疫、以及细胞存活等多方面的改变,继而干扰实验结果, ...

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细胞培养的惨痛经验教训

每天孝敬细胞比孝敬爹妈还用心,培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢?  早走早脱身,从此专注黑生物 1. 严格无菌操作,多喷喷酒精,要是对灭菌的东西不放心,自己包自己送自己烘干。  2. 不要和别人共用试剂耗材,自己准备一套。  3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。  4. 水浴锅很脏,生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏,勤换 (灭菌水加进去)。  5. 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外,超净台是用完就开。  6. 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在 ...

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细胞培养面面观

1、首先说清洗:对于玻璃器皿(如移液管、盖玻片之类)可先用酸液浸泡24h以上,再用清水浸泡24h。之后用清水将移液管冲洗10遍,除去残留酸液,再用双蒸水冲洗3-5遍,彻底洗净后放入不锈钢筒中,双层牛皮纸扎口,高压灭菌20min,烘干待用。我们实验室的酸液一般是次强酸液(重铬酸钾120g 浓硫酸200 mL 蒸馏水1 000 mL)配液时要小心烫伤。装培养基的瓶子则要在每次用完培养基以后就要立即洗净,临用时再次用清水冲洗3-5遍,再用双蒸 ...

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细胞培养之仪器的清洗

(一)仪器的清洗总的分为两大类:可泡酸的和不可泡酸消毒的。 酸指消毒的清洁液(由浓硫酸、重铬酸钾和蒸馏水配置的次强酸液)可泡酸的主要是玻璃仪器培养细胞的板子,离心管等塑料器皿。消毒过程:自来水冲洗3-5遍----→超声波清洗30′----→烘干----→濅入清洁液过夜(不少于6h)----→自来水冲洗15-20遍----→蒸馏水洗3-5遍,烘干备用。不可泡酸的主要是胶塞和盖子,虑器等,先在清水中濅泡后冲洗烘干----→2%NaOH濅泡过夜,自来水冲洗, ...

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细胞培养实验室试剂耗材配备

1、实验室设计细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁、空气清新,干燥和无烟尘。细胞培养工作包括:工作液配制、无菌操作(采样)、温育、无菌处理,细胞和用品贮存等。细胞培养室的设计实施原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室。2、常用设施及设备(1)超净 ...

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细胞培养常用试剂

(1)高糖DMEM溶液用新配制的三蒸水配制,高糖DMEM干粉(规格10×1L),溶入约总量的1/3的三蒸水,并用水洗净包装袋,在磁力搅拌器上搅拌30分钟,加入NaHCO2 3.75克,补加水至最终量。用1N HCL调整PH为7.2,0.22μm滤膜抽滤除菌,分装-20℃保存,使用时加10%的胎牛血清及双抗溶液(最终浓度:青霉素100U/ml,链霉素 100μg/ml)(2) 胎牛血清使用前56℃水浴30分钟灭活,无菌条件下分装成10ml包装,- ...

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超滤离心管怎么使用?

【求助】millipore超滤离心管想重复使用,请问如何清洗和保存?最近使用超滤管,由于管子较贵,想重复用几次,但找不到可靠的资料。不知如何清洗和保存,比如有人说用叠氮化钠,有人说用氢氧化钠,有人说用乙醇浸泡。莫衷一是。很急用。【回答精要】使用后用0.1M NaOH泡24h,然后20%乙醇浸泡保存。这个我是听老板们说的,的确乙醇泡完后孔径会增大,基本就是5-10KD最大,也就是说如果你的蛋白在21KD以上,应该没问题。或者可 ...

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构建多基因敲除动物模型,一切如此简单

我们实验室在细胞信号转导方面非常强,但是目前的趋势是没有动物体内的结果使文章的档次大打折扣。导师意识到这一点,3年前在我开始硕博连读的阶段铁了心要我构建基因敲除的小鼠来验证一些体外研究的结果。由于我们是一个传统的cellular biochemistry的实验室,基因敲除小鼠方面我们只有从书本上学来的理论知识。这样的课题对我来说真是极具挑战性,但是想到将来可能出非常好的成果,我也信誓旦旦的接下了任务。我们前期 ...

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离心管怎么清洗

millipore超滤离心管想重复使用,请问如何清洗和保存?最近使用超滤管,由于管子较贵,想重复用几次,但找不到可靠的资料。不知如何清洗和保存,比如有人说用叠氮化钠,有人说用氢氧化钠,有人说用乙醇浸泡。莫衷一是。很急用。【回答精要】使用后用0.1M NaOH泡24h,然后20%乙醇浸泡保存。这个我是听老板们说的,的确乙醇泡完后孔径会增大,基本就是5-10KD最大,也就是说如果你的蛋白在21KD以上,应该没问题。或者可以不用乙 ...

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移液器到底是什么?

移液器到底是什么呢?搜索了下google和百度,只在百度百科上看到微量移液器的简单定义,至于移液器是什么则只是概括了其特点,很是遗憾。于是,莱贝也只能通过介绍移液器的几个方面,试图让各位能够了解移液器到底是什么东西。如果说是问莱贝自己的看法,莱贝认为移液器就是一种用于方便我们用户移取液体样品的实验室常规仪器,优点是易操作,准确性高。1.移液器是移液管的升级版在遥远的一百多年前,实验室里的精英们开始用移液管来转移 ...

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师兄精心整理:SDS-PAGE失败实例综合集锦

师兄发现,最近做 WB 的小伙伴真的不少,为了解决一些小伙伴在WB上遇到困难,师兄专门跑去坛子里,把一些有关 WB 的好贴扒拉出来,供你们不时之需,同时也要感谢下我们无私的战友 lee800265。那么今天我们就从SDS-GAGE失败案例开始吧。想了解更多实验方法和技巧的同学,可以向我申请微信好友哦,我的微信号:shixiongcoming 。向我申请的时候一定要记得备注你的目的,要不然我可会拒绝你哦。SDS-PAGE “hall of shame ...

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脉冲场凝胶电泳技术

PFGE技术简介:1984年Schwartz和Cantor发明了交变PFGE技术,解决了大片段DNA (>40 kb)差异的问题,同时提高了DNA的分辨力。此后,随着PFGE技术的不断改进,现已具有分辨出高达10Mb级DNA的能力。这一独具的高分辨力使PFGE的应用范围已涉及到几乎所有生物基因组结构的研究。工作原理:大小不同的DNA 分子在交替变换方向的电场中做出反应所需的时间不同,一般较小的分子重新定向较快,在凝胶中移 ...

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三维细胞培养-支架培养模式

在细胞和组织培养领域,从上世纪70年代起二维(2D)培养科学家已经看到其局限性,并且更多地关注三维(3D)培养的优点,目前越来越多的研究从细胞培养的平面环境中转变到三维培养。当前,虽然对基于细胞的效应研究和毒性测试中,制药工业如今最常用的依旧是2D方式,3D培养技术已在学术研究中被广泛应用。细胞增殖,分化和代谢等生理活动都严重受到微环境的影响。当前细胞生物学研究大多还是在二维平面培养进行,这种平面培养、生长方式与 ...

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肿瘤与血栓

恶性肿瘤可通过多种途径导致血栓发生,影响肿瘤患者的生活质量和预后,血栓的形成又可以早期预示着肿瘤的发生,所以恶性肿瘤与血栓的相互关系越来越受到重视。恰当的预防血栓治疗不仅可减少并发症的发生,还可以改善肿瘤患者的预后。多种因素可以影响VTE发生,包括患者的年龄、既往是否患过VTE;肿瘤大小、肿瘤分期、手术切缘情况、血凝系统状况;治疗方式,如手术、放疗、化疗、激素治疗等。肿瘤本身会增加DVT和PE的风险,并且成为围手术 ...

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meta 分析:图解--利用 EndNote X1 轻松将文献导入 revman 5.0

EndNote 通过将不同来源的文献信息资料下载到本地,建立本地数据,可以方便地实现对文献信息的管理和使用。是一种很好的文献管理工具。在和revman5.0软件 的文献互动方面,和战友们交流一下我的经验。即通过截图来说明,如何很好的将endnote库中的文献轻松的导入revman5.0软件中,不在为参考文 献输入发愁,做到方便快捷、省时省力。希望对从事于循证的战友们有所帮助。1. 首先将endnote中已建立的文献数据库(关于此 ...

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细胞培养减少污染的小细节

很多实验者都不bother自己洗手,酒精一喷就去实验了。我告诉大家,这是极端错误。个人经验是,你仔细洗手比喷酒精效果还好。最好的是肥皂/香皂仔仔细细的洗手,一直到手腕,指甲缝都要洗。洗两遍是一个不错的选择。然后手上喷酒精。有人穿半截袖的白大褂去做实验,每次我看到都想骂。白大褂袖口要长,最好是袖口扎紧的那种,如果不能的话,把袖口窝向手臂。裸露的手腕部分一定也要喷酒精。戴上手套后手请避免接触工作台外面,如果不得已接触,那 ...

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分享自己关于qPCR(RT-PCR)数据相对定量的分析方法与经验

qPCR的数据相对定量分析其实很简单。我做了很多的qPCR实验,也看了很多的资料,包括Nature protocol, AB官方的分析教程,MIQE,甚至包括一些商业化软件使用的教程及教程里面记述的原理。我在这里跟大家分享一下自己的经验,最常用,最普遍的相对定量方法就是2^-△△Ct法,该法最最简单的说就是:首先将一次实验的所有基因Ct值整理好,之后用每一组样本自身的目的基因Ct值减去自身内参基因Ct值,得到的数就是△Ct ...

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TetraOne™ KO:基因敲除技术的重大突破

近日,赛业生物科技(Cyagen Biosciences)宣布推出其全球专利技术TetraOneTM KO,一种不仅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9(把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6个月),而且避免了TALEN、CRISPR/Cas9脱靶效应困扰的革命性技术。TetraOneTM KO的出现,是ES打靶技术制备基因敲除鼠的一个重大突破。基因组编辑的技术进展传统ES打靶、TALEN和CRISPR/Ca ...

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SPSS教程 之 生存分析的Cox回归模型(比例风险模型)

最近有同学问师兄,“最近我要做生存分析,可是我不太会,也不太懂,师兄能不能教教我”,好吧,今天开一贴,讲讲这个。有同样的问题的同学可以一起来看看,毕竟在临床、科研上,这方面知识还是很受用的。有什么想跟师兄讨论的,可以加师兄微信号:shixiongcoming,加我时,注意注明申请理由,如果申请理由是你的名字话,那你就会被师兄忽略掉。就这样吧。让我们开始征程。一、生存分析基本概念1、事件(Event)指研究中规定的生存研究的 ...

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