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RT-PCR、QPCR、Real-time PCR、real-time RT-PCR你真的区分的开吗?

丁香园

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多少同学能将 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR区分开?有多少同学还在犯晕?

今儿这贴,师兄就带你区分区分,拨开那扇 PCR 迷雾。


什么是 RT-PCR?

RT-PCR就是逆转录 PCR(reverse transcription PCR)或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行 DNA扩增。

了解更多:RT-PCR原理与实验技术RT-PCR技术概述PCR/RT-PCR疑难问题解答


那什么是 qPCR、Real-time-PCR?

其实 Rea-ltime-PCR和 qPCR(Quantitative Rea-ltime-PCR )是一码事,都是实时定量PCR,指的是PCR过程中每个循环都有数据的实时记录,因此可以对起始模板数量进行精确的分析。

虽然Real-time PCR(实时荧光定量PCR)和 Reverse transcription PCR(反转录PCR)看起来都可以缩写为RT-PCR,但是,国际上的约定俗成的是:RT-PCR特指反转录PCR,而Real-time PCR一般缩写为 qPCR(quantitative real-time PCR)

了解更多:QPCR的基础知识QPCR常见问题及其分析qPCR失败,罪魁祸首原来是


那什么是 real-time RT-PCR(或RT-qPCR)?

real-time RT-PCR中间的“RT”是 reverse transcription(逆转录),整个意思就是利用 mRNA 或 总RNA 为模板的实时逆转录PCR技术(quantitative Real-time RT-PCR)。real time RT-PCR指的是 qPCR+RT-PCR的组合,是说将mRNA逆转录为cDNA后再作为模板进行实时荧光PCR分析,因为RT-PCR是可以定性的,但不能进行定量检测的。

所以不难理解 real-time RT-PCR(RT-qPCR) 就是结合了荧光定量技术的反转录PCR:先从 RNA 反转录得到 cDNA(RT),然后再用 Real-time PCR进行定量分析(qPCR)。

所以,实时荧光定量PCR,它不仅可以用cDNA作为模板,也可以用基因组DNA等作为模板。

了解更多:Real-time qPCR手册---手把手教你从菜鸟到高手

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