In September 1993 Higuchi et al. published a report in the journal Biotechnology (NY). Titled “Kinetic PCR analysis: real-time monitoring of DNA amplification reactions,” the paper described the technique that would come to be known as Real-Time PCR (for more info, click here). In the original re ...
查了一些发现在本版还是有一些免疫组化方面的求助的，而其他版又没有旧帖整理这个分版，所以发在这里，望主任理解。1。免疫组化的原理http://www.dxy.cn/bbs/thread/856955http://www.dxy.cn/bbs/thread/1008921http://www.dxy.cn/bbs/thread/10119982。免疫组化的步骤http://www.dxy.cn/bbs/thread/1045385http: ...
大家好！我打算做半定量RT-PCR，把在文献上查到的引物（用来做实时定量）与GENEBANK里查到的cdna序列用PP5比较了一下，发现怎么好像不匹配？是不是我配的有问题？请大家帮我看看，谢谢！扩增产物有多长？CDNA:1 tggcgttgta tagttgggta cagcgaggct ggcgctgcgg tcagacgtgg gcgcctctct61 tgggtggcgg ctaccgggag ctctctgcga cccaggcccg gcag ...
请高手帮忙设计一对引物用于RT-PCR,有原基因全序列，我查了国外国内的文献上的引物，经PrimerPrimer5.0验证发现都不太好，自己又从来没有设计过引物序列，故恳请各位有经验的高手帮忙设计一下，多谢！！基因序列如下：ORIGIN1 gggggggggg atttagagac ttgctcttgc actaccaaag ccacaaagca gccttgcaga61 aaagagagct ccatcatgcc tggctcagca ctgc ...
1。PCR产物纯化需要的体积以及浓度http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3733888_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1477572_0.html2。PCR产物纯化后连接需要的体积http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3846185_0.htmlhttp://www.dxy. ...
刚开始作RT-PCR,让同学帮我设计了三个基因的上下游引物，如下： Primer A (bp233C): 5'-GAATTCACCACACGGCCATTGAAGCA-3'Primer B (bp25): 5'-AAGCTTCACATGGACGAGGAGGAGAC-3'Primer Balance: -A- -B- CommentLength 26 26% GC 50 53 3 % differenceTm(癈) 78 71 7 C?differenceTm (2nd round) 84 80 4 C?differencePrimer Ca ...
OLIGO 是一个从序列文件中搜索和选择寡核苷酸的多功能程序，应用于聚合酶链反应(PCR),DNA测序，定点突变及各种各样的杂交研究。OLIGO根据最近邻热力学值计算寡核苷酸的杂交温度和二级结构。 这个好工具也用于构建合成基因，在已合成的基因中发现适当的序列引物，发现和多元化一致的引物和探针， 甚至发现蛋白质潜在的限制位点。OlIGO 产品特色：1. 分析TM和内部稳定性，绘制溶解温度图和稳定性图；2. 给出寡核苷酸的重要相关信息；3. 显示 ...
mRNA的分离与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。进行Northern杂交或Sl 核酸酶作用图分析时，与总RNA相比，采用poly(A)+ RNA能获得更为满意的结果。 可以按照Gilham ...
北大医学部的新英格兰医学发信站: BBS 水木清华站 (Wed Dec 15 15:51:58 2004), 站内基础医学院神经生物学系于常海教授所带领的课题组在SARS病毒早期检测方面取得突出进展，其研究成果近期发表于国际顶尖医学类杂志《新英格兰医学》（《NewEngland Journal of Medicine》）(2004, 350: 1577-1579)，论文题目为Boosting the sensitivity of real-time polymerase-chain-re ...
别人的经验，还不错，大家分享一下吧！载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素a复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。b 抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+c 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段d P/E 启动子/增强子e Terms 终止信号f 加poly（A）信号 可以起到稳定mRNA作用二、 ...
实时定量PCR用于基因的定量分离——正在兴起的一项技术前言：目前许多关于定量PCR的实验报道证实了定量PCR由一门实验技术向科学研究的大的方向的转变。定量PCR有许多用途：测量mRNA表达的水平，DNA的拷贝数目，转基因的拷贝数目和表达分析，等位基因的鉴定和测量滤过性病毒的浓度测定。实时定量PCR的用途的应用范围非常广阔，而且它能够对菌种的增殖过程中低成本的反应器和反应物进行检测。成功的运用实时定量PCR并 ...
基本PCR引物设计参数引物设计的目的是在两个目标间取得平衡：扩增特异性和扩增效率。特异性是指发生错误引发的频率。特异性不好或劣等的引物会产生额外无关和不想要的PCR扩增子，在EB染色的琼脂糖凝胶上可见到；引物效率是指在每一PCR循环中一对引物扩增的产物与理论上成倍增长量的接近程度。①引物长度；特异性一般通过引物长度和退火温度控制。如果PCR的退火温度设置在近于引物Tm值（引物/模板双链体的解链温度）几度的范围 ...
jiangjun82313 wrote:发表一点不同看法:1. 相对定量还是有相当市场的, 大家看文献即可知道.2. 相对定量(2-2deltCt法)需要验证扩增效率, 且扩增效率接近100%. 在你提到的哪篇文章里有: (1+E)-△△CT, 2 -△△CT是当二者的扩增效率接近1时才能得到.3. 选择一个组织的检验扩增效率就可以, 因为扩增效率主要与PCR条件有关.4. 是每个组织都要做三个重复,然后取平均值,然后再在一组小鼠的相同组织中取平均值和内参基因相减. 可以分开 ...
1．我做的重复样品的标准曲线差别很大，这是什么原因？是不是CDNA样品不纯？答复：如果操作正确的话，重复样本是不应该差别很大的。做重复样本时，应当将所有的反应成分都先混合到同一反应管当中，然后再进行分装。这样可以最大限度地降低加样误差和样品混合不匀的问题。您可以尝试一下，如果还有问题的话，可以把结果文件直接MAIL给我们。以便我们可以更直观地了解问题。2．做realtime pcr的CDNA的浓度是多少？我看到有的文 ...
做RT-PCR可能遇到的一些问题，自己对症下药吧问 题1.RT-PCR 灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物可能原因：1） RNA被降解建议：使用前在变性胶上分析RNA以验证完整性使用良好的无污染技术分离RNA在将组织从动物体取出后立刻处理在100%甲酰胺中储存RNA2）RNA中包含逆转录抑制剂建议：通过乙醇沉淀RNA除去抑制剂。用70% (v/v) 乙醇对RNA沉淀进行清洗。可以加入糖元 (0.25μg到0.4μg /μl) ...
RNA 抽提中自备有机溶液的配制及保存问题RNA 抽提中涉及的有机试剂，包括苯酚、氯仿、异丙醇、乙醇。苯酚多为商品化的东西了，选择和保存都不应该有什么问题；只强调一点：尽管 Tris 饱和的苯酚也可以用于 RNA 的抽提，但使用水饱和苯酚会更好一些，因为 RNA 在 pH 7 以上的溶液中，发生降解的机率大大提高。下面是关于氯仿、异丙醇、乙醇的有关建议。选择国内大的化学试剂公司生产或者监制的分析纯级别试剂就完全可以满足要求。预处理不需要进行任何的预处理。绝 ...
第二届"荧光PCR－基础与应用"研习班第一轮通知(2006年10月31－11月4日，厦门)荧光PCR技术在疾病的快速诊断、病原微生物的耐药检测和基因突变检测等领域发挥了重要的作用。为了使更多的检验人员或研究人员能够尽快掌握该技术，厦门大学分子诊断实验室将继续与国外著名科学家合作，举办第二届"荧光PCR－基础与应用"研习班。本届研习班将在成功举办第一届研习班并获得广泛好评的基础上，进一步优化完善培训课程内容，融入荧 ...
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时 ...
PCR常见问题总汇PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底 ...
Real time PCR文献大全 这是目录，内容包括以下几类ReviewsBasics and Theory of real-time PCRClinical applicationsReverse Trascriptase PCRNormalizationSYBR GreenLightUp probesTaqman probesOther probing techniquesSingle-cell PCRImmuno-PCRMicroarrayReal-time PCR ...
