primer premier 这款大名鼎鼎的引物设计软件就不多介绍了。直接进入主题一、创建具有管理员权限的Command命令行快捷方式（因为windows 7 cmd默认不是以管理员权限运行，所以一定要改成以管理员权限运行才有用）。1、在桌面空白地方，点击鼠标右键，选择“新建”→“快捷方式”，如图：2、弹出创建快捷方式窗口，输入cmd.exe的路径及文件名，如图输入cmd.exe可执行文件的地址C:\Windows\System32\c ...
一直以来，不少战友在本版块反复发帖索取Primer/Oligo等软件及其注册码，甚至一再跟帖电邮索取，大大增加了版务工作！更重要的是违反了论坛相关规定！在丁香园虚拟社区基本规则中明确规定：在技术类讨论区讨论盗版软件、注册码、软件**等属于违例行为！另请阅读：关于通过Email在论坛索取资料的管理自公告之日，望各位战友自觉遵守版规，尽量避免此类事件反复发生！一经出现，初次给予锁帖并警告，警告不听者将从严处理！友情建议 ...
我在这个版面看到很多贴子都是求助寻找基因序列的。觉得这是个普遍的问题。其实这个很简单，大家应该学会使用LocusLink。随着genome sequence的完成，大家研究的基因序列基本上都已经知道了。如何才能找到自己的基因序列哪? 去NCBI的LocusLink:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/LocusLink/1.这是个功能非常强大的搜索工具。所有NCBI有的基因基本都连到了LocusLink。 ...
因为有热心战友的不断提问，“【心得】引物设计其实很简单，敢于尝试就会成功”就增加到三贴了，我把它们合并一下，方便战友指正吧！第一贴记得当时搞引物设计的时候，还是我的大师兄领入门的，在此谢过了。师兄教了一些基本原则后，就放羊了。接着自己捣鼓来捣鼓去，在导师的实验室内设计了十几条引物，用起来还蛮好的，逐渐赚了点名气。后来，就和上海鼎安合作了，帮别人设计引物在他们公司订购引物，拿点回扣。别人拿给我设计的引物，都是很头痛。因为客 ...
DNA定量方法http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=545030&sty=1&tpg=6&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=485501&sty=1&tpg=26&age=0真核细胞DNA的制备与定量http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=455281&sty=1&tpg=31&age=0大量组织样品病 ...
基本知识http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=19789&sty=1&tpg=70&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=89547&sty=1&tpg=66&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=701942&sty=1&tpg=13&age=0关于如何计算引物和核酸浓度的方法http://www ...
Oligo使用方法介绍作为目前最好、最专业的引物设计软件，Oligo的功能很强，在这里我们介绍它的一些主要功能：如：普通引物对的搜索、测序引物的设计、杂交探针的设计以及评估引物对质量等等。在正式进行引物设计前，我们首先面临的一个任务就是向Oligo程序导入模板序列，根据不同的实验情况，导入模板有三种方法：1，直接用键盘输入：a，点击file菜单中的New Sequence 浮动命令，或直接点击工具栏中的New Sequenc ...
最近刚开始做PCR，参考了很多与引物设计相关的帖子，结合自己使用primer5和oligo的体会，想谈谈自己设计引物的方法和步骤，恳请各位前辈指正。RT-PCR引物设计原则和方法在NCBI上搜索到该基因，找到该基因的mRNA，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中，Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。打开Primer Premier5，点击File-New-DNA sequence, 出现输入序 ...
PCR技术讨论版的公共邮箱为：dxypcr@163.com ，备份邮箱：dxypcr@126.com希望战友在上传的时候，同时上传到两个邮箱，谢谢！（大小1G,最大附件30Ｍ）。点击此处去邮箱为了帮助新手尽快熟悉实验，为了方便大家上传及下载资料，我们借鉴蛋白版的宝贵经验，准备设立公共邮箱，欢迎大家踊跃利用邮箱上传及下载资料，战友在上传资料时，先确认公共邮箱中有没有，如果已有上传，原则上不予加分。有需要者ＰＭ与我联系索取密码 ...
PCR技术在分子生物学领域的重要性自不必多说，各种新的PCR技术也不断涌现。引物的设计是进行各种PCR的重要前提条件。虽然现在有很多软件可以设计并评价引物，但在实际的PCR扩增过程中，必须对反应体系和反应条件进行优化，尤其是引物浓度，Mg2＋浓度，退火温度等。有时候无论我们如何优化，也拿不到目的产物，只能重新设计。鉴于在引物的设计和合成过程中所花费的时间、精力和财力（尤其对于新手而言），本着资源共享的原则，建立丁香 ...
这是一本有关PCR技术的新书，希望会为你的PCR试验提供帮助！上篇PCR的基本理论与技术第一章 聚合酶链式反应分子克隆(molecular cloning)、DNA测序(DNA sequencing)和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)是当今现代分子生物学的三大主流技术。在这三种技术中，PCR技术在实践中的应用日益广泛并随着分子生物学实验技术的成熟而不断的创新和拓展。早在二十世纪七十年代 ...
一、实时荧光Taqman 探针设计总原则：探针选择要保守，引物选择要保守，因此必须找一段100-200bp相对要保守的片段来设计引物与探针。即real-time PCR的扩增片段是50bp----150bp。当找不到150bp的保守片段时，必须确保探针的片段是保守的。在设计探针和引物时，要同时考虑在两条链上设计引物与探针。但要注意的是：在那条链上设计探针时，就应靠近在同一条链上设计的引物(即上游引物)。这样，可保证在将来扩增时 ...
战友们，这个东东是我从网上搜来的，感觉不错！与大家分享！第一部分RNA 提取策略一、提取原理1、RNA降解的原因：内源性RNAase是造成RNA降解的最重要原因，因为人体细胞自身就是几十分钟（20min？）mRNA被降解一轮，所以不管是组织还是细胞还是液体状样本在离开其中细胞的最佳生活状态后都应该尽快的被妥善的方法保存起来。外源性RNA酶也是一个需要注意的因素，最常见的就是毛发尤其头发，灰尘，唾液，塑料手套这四个兄弟。 ...
Rt-PCR实验步骤一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）1个125ml的白色试剂瓶（放无水乙醇）7、量筒：50ml、250ml、500ml8、容量瓶：250ml、500ml、1000ml9、 ...
丁香园的长远发展靠的是专业兴园。本版独立建版，特诚征专业讨论组员，请大家踊跃报名。有了您的积极参与，本版会更出色！组员要求：凡是热爱DXY，经常参与本版讨论，对PCR及相关技术感兴趣并有一定专业基础的战友，学历不限，工作年限不限，总积分超过20分，本版积分超过10分，即可申请为组员。组员的权利：1、有价值的帖子加分，每5个在本板块得分的帖子（时间不限），（只包含专题讨论和回答问题的帖子、对本版专业建设提出非常有意义的帖子 ...
实时定量PCR完全手册方法简介所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行，PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线。RT-qPCR是由三个步骤组成:1.反转录:依赖反 ...
做了好多DNA提取保存，吃了很多亏给大家点建议吧：（有疑问可以回帖，有时间我会回答如果我知道） 血液保存：EDTA抗凝最好，肝素也可以不过经常会影响后续试验，一般可以保存在-20和-80保存3-5年没有问题——保存时间越长似乎dna提取越少，再长时间我也没有试过，注意解冻一次大概损失20%左右（提取感觉估计得到的可能不准），放的时间长也会降解一些。4°做好不要太长3天我是试过没有问题再长不知道了血凝块就算了吧太难了结果不 ...
POST by Bingsen Xu前言：我是刚刚注册到丁香园，在PCR技术讨论版看见置顶贴，“请求助引物设计的战友先进来这里！”稍微浏览了一下，发现很多朋友对PCR引物设计还不是很熟悉，我愿意把自己积累的一点引物设计方面的经验和大家分享，希望不会做引物设计的朋友看完之后，可以不用再发求助贴而是自己动手做引物设计或者引物检验。开始之前：其实非常简单，不需要你下载任何软件，但是你得有一台电脑能上网。当然，最重要的是，你要很清楚 ...
园子里原来有关于这本书的帖子，采用56邮箱共享，均已失效，现在重新上传，申请版主加分：聚合酶链反应(PCR)自发明至今的20年来，经过不断的开发和改进，现在已经广泛应用在诸多领域，是分子生物学、临床诊断、法医检验等实验室的常规技术。 本书是美国冷泉港实验室出版社PCR Primer：A Laboratory Manual第二版的影印本，是第一版的全面更新和升级。本书由从事PCR研究的专家们共同研讨和撰稿，是一部最新、最权威的PCR ...
PCR引物设计的11条黄金法则1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA ...
