【分享】美国冷泉港实验室经典之:PCR技术实验指南(美)C.W.迪芬巴赫 G.S德威克勒斯(申请加分)
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聚合酶链反应(PCR)自发明至今的20年来,经过不断的开发和改进,现在已经广泛应用在诸多领域,是分子生物学、临床诊断、法医检验等实验室的常规技术。
本书是美国冷泉港实验室出版社PCR Primer:A Laboratory Manual第二版的影印本,是第一版的全面更新和升级。本书由从事PCR研究的专家们共同研讨和撰稿,是一部最新、最权威的PCR技术实验手册。其内容从最简单的PCR操作到最新的技术改进,从最基本的PCR技术到各种奇思妙想的PCR应用技巧,无所不至,令读者目不暇接、备受启迪。具体内容包括PCR 导论、样品的制备、引物设计、PCR产物检测(定量和分析)、RNA样品的PCR、PCR介导的克隆、PCR法制备突变体、其他扩增技术等。每个操作都配有疑难解析和完整的参考文献以供答疑、检索。
本书是《分子克隆实验指南》的姊妹篇,可供从事分子生物学、遗传学、细胞生物学、生物化学以及医学各个领域研究的科研与教学人员参考,既是实验室必备的工具书,也是研究人员开阔眼界、拓展思路的不可不读之经典。
目录
第1篇 PCR导论
1 建立一个PCR实验室
2 PCR残留污染的处理:一种酶学策略
3 高保真PCR酶
4 PCR的最优化和常见问题解析
5 富含GC片段的PCR扩增
6 精确扩增大片段的技巧
7 PCR引物设计
8 PCR扩增DNA的非放射性循环测序
第2篇 样品的制备
9 DNA的纯化
10 RNA的纯化
11 激光捕获微分离技术原位定位基因表达
12 克服PCR受抑制的策略
第3篇 RT-PCR方法
13 相对定量RT-PCR和竞争定量RT-PCR内对照的使用
14 四种实时PCR检测系统的比较:Bio-Rad I-Cycler、ABI、7700、Roche LightCycler、the Cepheid Smartcycler
15 定量PCR的新技术
16 RNA的扩增:用镁激活的热稳定DNA聚合酶进行高温反转录和DNA扩增
第4篇 PCR产物的检测:专门应用
17 杂合性的丢失:一种鉴定肿瘤基因组上染色体区段缺失的多重PCR方法
18 单链构象多态性分析
19 逆转录酶原位PCR
20 灵敏快速的突变检测方法——错配位点的固相化学切割法
第5篇 用PCR分析基因的差异表达
21 PCR在基于微阵列的基因表达分析中的应用
22 利用抑制性消减杂交技术鉴定差异表达的基因
23 基因表达分析中的荧光mRNA差异显示技术
第6篇 用PCR进行克隆
24 以PCR为基础的文库筛选方法
25 经典RACE(cDNA末端快速扩增)法的改进
26 用PCR合成和分析DNA文库
第7篇 PCR产物的克隆
27 克隆PCR产物的策略
28 PCR产物双向和定向克隆
29 核糖克隆:用含有一个核糖核苷酸末端的PCR引物进行DNA克隆和基因构建
第8篇 利用PCR进行诱变
30 诱变PCR
31 快速PCR定点突变
32 利用PCR来突变和合成新的重组基因
33 流线型基因装配PCR
附录1 专利
附录2 在PCR中使用的寡核苷酸的修饰
附录3 注意事项
附录4 供应商
索引
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