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常用抗体标记荧光染料的选择

【嘉美生物】随着免疫荧光技术的不断发展,荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学实验中。目前,市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM, USA); Alexa Fluor®系列(Life technology, USA); DyLight系列; Cy系列; IR Dye系列等等。使用最多的为Alexa Fluor®系列和CFTM系列。一、CFTM系列染料的核心对比Alexa Fluor®系列具有以下几点优势:1、新型罗丹明核心 ...

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浅谈一般的细胞传代方法

【嘉美生物】开始细胞传代前,仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全。细胞与试剂方面:1、细胞(单层细胞,镜检适合)2、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)3、灭活小牛血清、庆大霉素溶液(1 万单位)4、7.5%NaHC03 溶液5、0.25%胰蛋白酶6、PBS 洗液。实验小用具方面:1、小方瓶(100m1)2、克氏瓶3、胶塞4、吸管(10ml、1m1)5、细胞吹打管(20 ml)(以上用具需经121℃至少15 分钟 ...

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甲基化MSP特异性PCR全程易出现的常见问题与相关控制措施

一、亚硫酸氢钠修饰过程中可能出现的问题及应对措施【嘉美生物】亚硫酸氢钠修饰DNA的目的是将DNA序列中未甲基化的胞嘧啶完全转化为尿嘧啶,而甲基化的5一甲基胞嘧啶保持不变。影响此过程的主要因素有修饰试剂的浓度、反应温度、反应环境的pH值及反应时间。其中任何一个环节出现问题都将导致MSP扩增失败,体会如下:(1)亚硫酸氢钠的浓度最好控制在3.0~3.9 mol/L为好,其pH值必须用NaOH精确调整至5.0;(2)修饰时间应 ...

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浅谈流式核内蛋白染色步骤

【嘉美生物】北京嘉美生物就eBioscience公司的产品 (#00-5523 Foxp3 staining buffer set使用方法,也适用于胞浆和核内抗原的同时检测)浅谈流式核内蛋白染色步骤:1、染表面抗体按说明书条件孵育全血样品孵育抗体后加入不含固定剂的溶血素(按厂家说明操作)溶血完毕。2、用2ml预冷流式染色缓冲液(Flow Cytometry Staining Buffer)洗涤细胞300-400g离心5分钟,去上清。3、用3倍体 ...

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统计第十一课:SPSS 多相关样本的非参数检验(Friedman检验)

先讲讲什么是 Friedman 检验Friedman 检验是利用秩实现对多个总体分布是否存在显著差异的非参数检验方法。其原假设是:多个配对样本来自的多个总体分布无显著差异。SPSS 将自动计算 Friedman 统计量和对应的概率 P 值。如果概率 P 值小于给定的显著性水平 0.05,则拒绝原假设,认为各组样本的秩存在显著差异,多个配对样本来自的多个总体的分布有显著差异;反之,则不能拒绝原假设,可以认为各组样本的秩不存在显著性差异。基于上述基本思路, ...

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Fmr1基因敲除小鼠前扣带回中受损的突触前长时程增强效应

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细胞外囊泡(细胞微粒、外泌体)检测新趋势

打造细胞外囊泡(细胞微粒、外泌体)检测新趋势

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超高检测速度的光栅型酶标仪实时监测三维心脏组织的钙流变化

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利用单分子分析 “看到” RNAi

在RNAi过程中,siRNA会识别mRNA上的靶点区域,并引导AGO等多种蛋白在该区域组成一个沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC),在该区域的特殊位点将mRNA切开,造成mRNA降解,但这个靶点识别、切割及释放的具体过程及分子机制并不清晰。7月2日发布的Molecular Cell中,来自东京大学和第三军医大学的研究者利用单分子成像分析技术,成功地解析了RISC的工作过程。本项 ...

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更高活性——植物源重组人IGF-1融合蛋白

植物源重组人胰岛素生长因子融合蛋白(OsrIGF-1),胰岛素在无血清细胞培养中的最佳替代品

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CTL 杀伤实验 不懂操作步骤的同学看这里

先说一下啥是CTL,CTL就是细胞毒性 T 细胞(cytotoxic T lymphocyte CTL),一般应用于肿瘤研究领域。CTL 杀伤靶细胞主要有两种途径:即细胞裂解性杀伤和诱导细胞凋亡 ( Apoptosis)。前者指 CTL 分泌诸如穿孔素一类的介质损伤靶细胞膜;后者指 CTL 通过表面 FasL 与靶细胞表面的 Fas 结合,或者通过释放粒酶 B 至靶细胞后诱导靶细胞凋亡 (Apoptosis)。CTL 一般的实验步骤如下:1、制备效应细胞,靶细胞,用 RPMI-1640 培养液调至所 ...

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统计第十课:SPSS 重复测量的多因素方差分析

前面几期,我们讲了基本的方差分析,但是在一些研究中,我们要对样本进行多次重复实验,那么,师兄今天就来讲讲重复测量方差分析。欢迎成为我的好伙伴,让我们一起共同进步,师兄微信号:shixiongcoming,或者扫描下方的二维码。一、概述重复测量数据的方差分析是对同一因变量进行重复测量的一种试验设计技术。在给予一种或多种处理后,分别在不同的时间点上通过重复测量同一个受试对象获得的指标的观察值,或者是通过重复测量同一 ...

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几种 HRP 底物及其操作

底物范围较广,包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。二氨基联苯胺/金属盐DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物,在水和醇中不溶解。多数情况下,推荐在DAB中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中,辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产物呈暗蓝灰色至黑色,且在水及醇中稳定。DAB/金属盐染色应用的组织染色范围较广。 1.需要的溶液和特殊设备 DAB,0.05mol/LTris缓冲液( ...

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多抗制备方法

利用家兔的多抗制备方法

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统计第九课:SPSS相关性分析(卡方检验)

一、相关分析方法的选择及指标体系 (一)两个连续变量的相关分析1、Pearson 相关系数最常用的相关系数,又称积差相关系数,取值-1 到 1,绝对值越大,说明相关性越强。该系数的计算和检验为参数方法,适用条件如下:(1)两变量呈直线相关关系,如果是曲线相关可能不准确。(2)极端值会对结果造成较大的影响(3)两变量符合双变量联合正态分布。2、Spearman 秩相关系数对原始变量的分布不做要求,适用范围较 Pearson 相关系数广,即使是等级资料 ...

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ELISA 技术各步骤操作要点

优质的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异,国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点,珠式、管式及磁性球ELSIA,国外试剂均与特殊仪器配合应用,两者均有详细的使用说明,严格遵照规定操作,必能得出准确的结果。

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实时定量PCR探针概述

实时定量PCR (qPCR)的优势•实时检测PCR反应过程•精确计算出每个循环的PCR产物量•扩增和检测同时进行•消除后续PCR的干扰在实时定量PCR反应中,杂交探针与插入染料如SYBR Green相比是更好的选择。荧光标记探针可以提高实时定量PCR结果的效率、灵敏度和特异性。而且定量PCR可以在一个反应里同时检测多个目标基因。实时定量PCR的应用•基因表达分析•转基因检测和定量•病原体检测和定量•基因型/ SNP分析•突变 ...

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通过序列设计解决关于多肽的一些问题

多肽是由复杂分子组成的化合物,每一条序列都有其独特的化学和物理属性。除了有些多肽难于合成,大多数多肽相对容易合成,但是纯化可能较困难。很多肽水溶性较差,因此在纯化时,这些疏水性多肽常常需要溶解在有机溶剂或者特定的缓冲溶液中。这些有机溶剂或者缓冲溶液有时并不适合生物学等方面的实验,所以就不能用这些多肽进行研究工作。因此,在合成多肽时,我们会对这些多肽序列进行分析,以确定是否难以合成或水溶性的问题。针对一些有着特殊 ...

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统计第八课:SPSS 之二项 Logistic 回归分析

Logistic回归主要用于因变量为分类变量(如疾病的缓解、不缓解,评比中的好、中、差等)的回归分析,自变量可以为分类变量,也可以为连续变量。他可以从多个自变量中选出对因变量有影响的自变量,并可以给出预测公式用于预测。因变量为二分类的称为二项logistic回归,因变量为多分类的称为多元logistic回归。下面学习一下Odds、OR、RR的概念:在病例对照研究中,可以画出下列的四格表:暴露因素病例对照暴露ab非暴 ...

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