CTL 杀伤实验 不懂操作步骤的同学看这里

先说一下啥是CTL，CTL就是细胞毒性 T 细胞(cytotoxic T lymphocyte CTL)，一般应用于肿瘤研究领域。

CTL 杀伤靶细胞主要有两种途径：即细胞裂解性杀伤和诱导细胞凋亡 ( Apoptosis)。

前者指 CTL 分泌诸如穿孔素一类的介质损伤靶细胞膜；

后者指 CTL 通过表面 FasL 与靶细胞表面的 Fas 结合，或者通过释放粒酶 B 至靶细胞后诱导靶细胞凋亡 (Apoptosis)。

一般 CTL 杀伤实验步骤有如下几步：

1、制备效应细胞，靶细胞，用 RPMI-1640 培养液调至所需浓度。

2、于 96 孔培养板上进行杀伤试验，设有杀伤试验孔（效、靶细胞各 100ul），自发释放孔（靶细胞 100ul，RPMI-1640 培养液 100ul），最大释放孔（靶细胞 100ul、1％PN-40 100ul）每孔均设 3 个复孔。

3、于 37 度。5％CO2 孵育箱培养 2 h。

4、用冷 0.9％NaC l50ul/孔中止效靶反应。

5、1500rpm，离心 5 min。

6、每孔取上清 100ul，置于酶标测试板中。

7、每孔加入 100ul LDH 室温反应 10～30 min。

8、每孔加入 30ul 0.1mol/L 柠檬酸钠，中止酶促反应。

9、于酶标仪上 570nm 处测 OD 值。

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