zj000718 想请问各位大虾 如果损伤致凋亡模型中，经典凋亡途径（caspase-3为代表）表达很好，还会有AIF等非caspase依赖性通路存在吗？(怎么验证他们之间是否存在交互效应呢)如果想从体内抑制caspase通路 什么方法比较可靠呢？基因敲除、局部注射siRNA、局部注射广谱caspase通路抑制剂？？？是否有比较确切的方法呢？？？请做过这方面研究的大神们指教，谢谢!!!freecell http://www.google. ...
lbqlxy 我的目的基因是 人 rab23 约2000bp请公司设计了3个siRundefined*段 位置分别在200 600 800处 本打算用来筛选出一个干涉效果好的片段在复习文献中发现 单个片段可能因为脱靶效应 影响实验准确性现在的问题是 能否用我现有的3个片段 组合成pool（三者各取三分之一的量组成一份）转染细胞？？ 有无组合的原则？？lmnsmu 一般不这样做。单个片段可能因为脱靶效应而无干扰作用，所以才设计数个片段，通过预实验检测它们哪一个干涉效果好，再用于 ...
mnidr 我现在要做一个有9个基因的基因家族的northern杂交，看一下这些基因的表达情况。需要设计cDNA的引物去P出一段500bp左右的片段来进行探针标记，但是这9个基因的同源性太高了，只能在cDNA序列的两端找到一些非保守的区域，但是实验室的一个师兄说，cDNA两端是不能设计引物的，因为RNA的两端是“可变区”在这些可变区设计引物，做PCR可能会出不来结果，就是说网上查到的RNA序列两端的几十个碱基是 ...
徐州往事 我想做大鼠的p38MAPK的试验，需要用到SB203580干预，请问在大鼠中，SB203580的给药途径和剂量，最好能提供相关文献。谢谢piaopiao5556 彼此彼此 ，我也做这个的 各个文献用量不一样，尤其关于大鼠的很少，看到一篇要用到50mg/kg。实验1小时前给药，哪来这么多钱啊？624980241 侧脑室 给药的量是 多少啊 ？ldmin 貌似从1mg/kg——10mg/kg都有人在用。。。大鼠。。。。我也在查，，我打算用1mg/kg ...
dnazyme 每个领域都有独特的研究方法，理解其方法的优缺点特别关键，大家是否对甲基化组（甲基化谱）感兴趣？列举了一些能够通过PubMed搜到的代表性论文。Profiling DNA methylomes from microarray to genome-scale sequencing.生物芯片的方法。DNA methylome of familial breast cancer identifies distinct profiles defined by mutation ...
霍一刀hxs 各位高手：对于某一特定的RNA，通过何种方法判断其所在细胞内的位置？多谢。zoeru2007 原位杂交吧。。。sbch1532 霍一刀hxs wrote:各位高手：对于某一特定的RNA，通过何种方法判断其所在细胞内的位置？多谢。原位杂交可以霍一刀hxs 多谢zoeru2007和sbch1532的帮助。呵呵hyjtb 免疫荧光能看出来么？霍一刀hxs hyjtb wrote:免疫荧光能看出来么？试试此方法，谢谢。bigbang_0_0 hy ...
lifengna 各位战友，最近在做雷帕霉素对mTOR通路的抑制试验，培养的是C2C12细胞，在分化阶段进行干预，其中一组单独添加50 um/L雷帕霉素，奇怪的是不仅没有抑制C2C12的分化，反而比空白组更好，这是怎么回事呢？排除实验操作中的问题。谢谢大侠出手相救！zhm1212 你做雷帕霉素50 um/L，这个浓度难道不高吗？有报道称全血中雷帕霉素安全有效的浓度窗为5．5～16．4 nmol／Lbubu88 你是用的哪个公司的雷帕霉素？ ...
tang1227 绿色荧光转基因小鼠的皮肤移植到普通小鼠身上N天后，肉眼看到皮肤明明还在，但是荧光显微镜下却看不到荧光，这是为什么？是不是荧光会自身淬灭？还是有其他原因？zjubell GFP小鼠荧光很强的，见附件，我这只是全身表达GFP的。在UV下照，裸露的皮肤都能看到荧光。怀疑你的皮肤已经坏死了，那不表达这个蛋白了，自然就没荧光了。bigbang_0_0 zjubell wrote:你的皮肤已经坏死了纠正一下，是你的小鼠的皮肤 ...
forevercan 想请教下园子里的各位xdjm们一个问题，那就是LY294002：PI3K/AKT阻断剂的问题，LY294002是PI3K通路的阻断剂，他到底是阻断了PI3K的蛋白表达，也就是说使PI3K的蛋白得表达下降了；还是阻断了PI3K蛋白的磷酸化，说明书只是说体外培养的细胞加入该阻断剂后，可以抑制AKT的磷酸化，但是对PI3K的蛋白及其磷酸化PI3K蛋白的改变未提及。请指教。forevercan 自己顶一 ...
lwq652 微生物中recA基因编码的是什么酶？他有什么作用，他与限制修饰系统有何联系？对他敲除有何用处？bigbang_0_0 DNA重组，敲除以后就不能重组了，质粒在里面就自由了。lwq652 bigbang_0_0 wrote:质粒在里面就自由了。质粒不会被宿主里面限制性酶酶切掉吗？bigbang_0_0 lwq652 wrote:质粒不会被宿主里面限制性酶酶切掉吗？这个跟RecA的功能没有关系，质粒要保持稳定，除了要敲除感受态细胞 ...
gzlaotouzi 我想知道，经过芯片或者其它手段确认了的，与某一类肿瘤或者某一特定疾病相关的所有差异表达有意义的microRNA群，我可以借助哪些手段得知？shilei5794749 http://www.mir2disease.org/ —— “search by disease name”路得自己走 shilei5794749 wrote:http://www.mir2disease.org/ —— “search by disease name”这个不错！shen ...
霍一刀hxs 各位高手，已经知道某个基因序列的一部分，如何得知其全长基因序列？首先，该序列只有mRNA序列可知。有没有专业的网站，可以根据一段cDNA序列，预测一下它的UTR区的序列？多谢。freecell RACE霍一刀hxs 谢谢freecell.霍一刀hxs BLAT Search Genome呵呵zjubell 看你是什么物种了，如果完全是未知物种，那建议全基因组测序好了，如果是细菌的基因组，整个测下来也就1万块钱左右。拿到序列后 ...
Rachel1123 求助各位高手，RIPA裂解液提取的蛋白可以用于做STAT3的wb吗？还是需要专门提取核蛋白？多谢！顺便再问一句，stat3在胃癌细胞SGC7901中是否高表达？wangfanyun RIPA裂解液可以做stat3的WB。不需要专门提取核蛋白！zfyyzz00 一般来说，stat是转录因子，只有磷酸化的stat才有活性，它通过形成二聚体的形式进入细胞核内，和相关靶基因结合，启动靶基因转录，因此一般情况下 ...
longyu2728 请问DNA单链的长度，eg,含30个碱基的DNA链的长度，是纳米级，还是埃级，如何计算，每个碱基大约多长呢？不胜感激！freecell one bp corresponds to circa 3.4 Å of length along the strand.longyu2728 freecell wrote:one bp corresponds to circa 3.4 Å of length along the strand.Thank you!本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前 ...
brainpower 对大鼠进行体内转染，Muramatsu等报道在材料一致的情况下，电穿孔法的基因导入和表达效率明显高于其它方法，且适用于多种组织的操作。可是现在又不提倡电穿孔法了。因为实验经费的问题，我又不能去将一些转染方法进行对比。求助体内转染哪个方法转染效率更高？freecell 体外转染取决于细胞系，体内转染取决于组织和转染分子，不能一概论之。brainpower 谢谢你的解答。我是想转染到大鼠的腓肠肌上。那么 ...
Y03013 请问XDJM，如何获得未知miRNA 的表的情况呢freecell 现在比较流行的做法是进行deep sequencing。权威的miRNA公共数据库Sanger miRBase已升级至最新的13.0版，发布的microRNA序列信息已接近10000条。由于越来越多的miRNA正在被发现，miRBase数据库每隔4~5个月就会发布新的数据版本。尽管如此，我们仍然对大量的物种miRNA信息一无所知，它们的重要生物学 ...
太峰之巅 目前，对小RNA的研究进展的相当迅速，小RNA的功能蛋白如Ago，Dicer等也有相当的研究。就对小RNA新的功能作用蛋白大研究方法，高手进来畅聊。版主freecell留言:你所知道的有哪些方法？只有先提出自己的见解，才能抛砖引玉，引来更多的讨论。freecell see this post:http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=16504126&sty=1&tpg=1&age=0太峰 ...
深空明月 大侠同志们：请教一下PCR检测出mRNA的表达量是升高的，能否说明那它的蛋白质的表达量也是升高的呢？如果蛋白质量是升高的，那它的机理是什么样的？如果不一定是升高的，其缘由又是什么样的啊？还有一个问题：受体分子在细胞中是有限的，当受体处于饱和状态时，受体mRNA的表达量会是什么情况呢？关于分子机制这方面的我不是很明白，请赐教。急freecell mRNA表达量升高，不一定会说明蛋白质表达量升高。这是因为在翻译过 ...
einstan001 最近本人正在做缺氧复氧诱导细胞凋亡实验，实验对象为贴壁细胞，诱导完凋亡后须收集细胞提RNA和蛋白并检测一些凋亡相关酶的活性与表达，在缺氧复氧后出现大量漂浮变圆的细胞，由于我采用采用胰酶消化的方法收集细胞后提RNA和蛋白，由于消化前需将原培基倾倒掉并用PBS洗涤细胞，因此这些漂起来变圆的细胞大量丢失，请问这些漂浮变圆的细胞我需要收集吗？这些细胞的丢失对我的实验结果影响大吗？谢谢hggjoy 需 ...
jchent 有意研究wnt信号通路，但是生手不知如何下手。看到一篇文献做的是鸟的wnt相关基因表达，我想换一种动物模型，比如将鸟换成小鼠，将来可以比较二者的不同。不确定这是否可算作是科研创新？意义大吗？非常感谢！！qingguyouquan 我认为不算科研创新，是跟在别人后面走而已。不过也可以了，如果结果好的话毕业时没问题的。严格意义上的创新基本上是别人没怎么做或者没怎么涉及的，而你从另一个角度独辟蹊径，取得了一定成果 ...
