注射完成后保持针在血管内多留 10-15 秒防止回流病毒，然后拔掉针头，用手轻轻用力按压片刻。

由于血脑屏障（BBB）的存在，外周血内的很多物质无法有效进入到中枢神经系统（CNS），为了有效对 CNS 系统进行基因操作，可借助脑立体定位仪器直接对动物特定脑区进行直接的病毒操作。

相较于尾静脉注射，肝门静脉注射具有减少病毒注射体积（比如 30-50μL），增加肝脏特异性感染等优点。

腹腔注射时，待针头到达皮下后，继续向前进针 3mm-5mm，再以 45 度刺入腹肌。

本视频示意利用 AAV 携带绿色荧光蛋白 GFP 感染小鼠的眼睛。

提前一天接种细胞，一般保证第二天进行病毒感染时细胞汇合度介于 50% 至 70% 之间。

注：Polybrene 可提供病毒感染效率，但仅适用于对该试剂无明显毒性反应的细胞，如不加 Polybrene 可直接跳过该步骤。

细胞房使用前 30min 开机净化，病毒操作需带双层手套及双层口罩，做好消毒后开始后续操作。

m6A 是目前已知的真核细胞 mRNA 上最为常见的一类化学修饰，它的建立、读取和擦除分别受到相应甲基化酶（writer）、结合蛋白（reader）以及去甲基化酶（eraser）的动态可逆调控。研究表明，m6A 能够通过调节 mRNA 的剪接、出核、稳定性以及翻译等生命周期活动，参与调控机体的诸多生理或病理进程，包括胚胎发育、肿瘤以及神经退行性疾病的发生等。然而，在生理性衰老过程中，m6A 对于器官稳态维持的调控作用以及关键分子机制均有待阐明。2023 年 4 月 6 日，中国科学院动物研究所刘光慧研究组、曲静研究组联合中国科学院北京基因组研究所慈维敏研究组以及张维绮研究组在Nature Aging杂志在线发表了题为m6A epitranscriptomic regulation of tissue homeostasis during primate aging的研究论文。该研究利用非人灵长类动物（食蟹猴）生理性衰老的多器官研究模型，同时结合基于基因编辑和人类干细胞定向分化的研究体系，通过系统绘制器官和细胞衰老过程中 RNA m6A 修饰的动态图谱，解析了 RNA 甲基化修饰及相关基

长久以来，剪接体的调控机理是怎样的，它们在细胞内部的动态组合和变化是怎样的，深深地吸引着科学家们的研究兴趣，但其神秘的面纱一直未被揭开。2023 年 4 月 6 日，西湖大学施一公团队在Molecular Cell杂志发表研究论文Structural basis of pre-tRNA intron removal by human tRNA splicing endonuclease，该研究首次解析了人类 tRNA 剪接内切核酸酶（TSEN）在催化前和催化后状态下与全长 tRNA 前体 (pre-tRNA) 结合的低温电子显微镜结构，显示了 TSEN 如何识别 pre-tRNA，并将 3' 剪接位点和 5' 剪接位点定位到其切割位点，综合利用结构生物学和生化工作解释了人类 TSEN 去除 pre-tRNA 内含子的分子机制。图 1：来源Molecular Cell研究内容转运 RNA（tRNA）对生物遗传信息的传递至关重要，它通过核糖体将信使 RNA（mRNA）翻译成蛋白质。成熟的 tRNAs 由前体 tRNAs（pre-tRNAs）通过一系列的转录后加工和修饰步骤产生，从 pre-

燃烧多余卡路里，保持健康身材的生活理念正在被现代人广泛接受并付诸实践。对于爱美人士而言，「有效」和「安全」是其特别关注的点，既要有效地甩掉脂肪，也要保障减肥时身体机能维持平衡的状态。间歇性禁食是一种进食和禁食交替进行的饮食方式，越来越多的证据表明，间歇性禁食可以有效预防多种疾病，包括糖尿病、癌症和神经退行性疾病。此外，间歇性禁食也是减少热量摄取、减轻体重、改善代谢的可行策略，因此成为不少爱美人士的减肥首选。间歇性禁食有着多种不同方案，常见的有 16：8 断食法（16 小时禁食，8 小时进食）、12:12 断食法，甚至还有更极端的 23：1 断食法。虽然间歇性禁食有益于健康，但每次禁食的最佳持续时间仍然是一个悬而未决的问题。近日，湖南师范大学李国林团队在Cell Reports杂志发表研究论文Circadian transcriptional pathway atlas highlights a proteasome switch in intermittent fasting，该研究发现禁食 16 小时是一个关键节点，能够启动肝脏中 43 条经典通路的节律性共振和激活蛋白酶体。并确定肝

研究背景Angelman 综合征是一种神经遗传性疾病，患者通常会出现智力障碍、运动障碍和语言障碍等症状。该疾病又被称为「天使综合症」、「快乐木偶综合征」，因为临床表现为智力低下及全面的发育延迟，小头畸形、多动，存在运动障碍，常有频繁无诱因的暴发性笑或微笑、表情愉悦、拍手等行为。美国食品和药物管理局（FDA）于去年授予 Ionis 公司的 ION582 用于治疗 Angelman 综合征的孤儿药和儿科罕见病资格认定。但是目前尚未有能治愈 Angelman 综合征的上市药物。Angelman 综合征是由于母系基因组中 UBE3A 基因的缺陷或功能突变导致的，而父系基因组中的 UBE3A 基因则被非编码 RNA UBE3A-AS 转录本所抑制。UBE3A-AS 转录本是一个非编码 RNA，会抑制父系基因组中 UBE3A 基因表达。因此可以通过针对 UBE3A-AS 的转录起始区域进行干预，以恢复父亲基因组中 UBE3A 基因的表达。在这篇题目为：An ASO therapy for Angelman syndrome that targets an evolutionarily conser

如果需要同时纯化多个蛋白样品，且样品体积小时，可以用小离心柱来操作。如视频中所示，这种小离心柱中通常装填了相应的纯化树脂，实验操作起来简便快捷，通常兼容 1.5 ml 或 2.0 ml EP管。尤其可以使用多个小柱子来同时对不同的蛋白质进行批量纯化。本次视频演示了使用IBA的即用型离心柱空柱套裝，搭配Strep-tag蛋白纯化填料纯化目的蛋白的实验操作。

导读极端低温是有害的，但适度降低体温却对机体有益。事实上，降低体温已被证实可以延长两种变温动物（秀丽隐杆线虫、黑腹果蝇）和恒温动物（啮齿动物）的寿命。例如，秀丽隐杆线虫从标准温度转移到较温暖的温度时，寿命较短，而暴露在低温（15°C）时，寿命则显著延长。体温和寿命之间的相关性在人类中也有报道。更加有趣的是，自工业革命以来，人体体温每十年下降约 0.03°C，这与过去 160 年来人类寿命的逐渐延长存在潜在联系。尽管低温对寿命的影响早在一个多世纪前就有报道，但人们对低温如何影响寿命和健康知之甚少。2023 年 4 月 3 日，来自德国科隆大学的研究人员在Nature Aging上发表了题为Cold temperature extends longevity and prevents disease-related protein aggregation through PA28γ-induced proteasomes的文章。在这项研究中，报道了一种机制，或能解释适度低温为何能延长寿命，并减少年龄相关性蛋白质功能失调。研究显示，在秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans

本周学术君继续带来 CNS 最新进展，助力大家勇攀科研高峰！1.Cell Research：揭示猴痘病毒 DNA 复制机制去年，猴痘疫情被世卫组织宣布为突发公共卫生事件。2023 年 3 月 27 日，武汉大学药学院董长江/张郑宇团队在Cell Research杂志发表研究论文Cryo-EM structures of human monkeypox viral replication complexes with and without DNA duplex。该研究通过冷冻电镜解析了猴痘病毒（MPXV）聚合酶全酶和 DNA 结合状态的聚合酶全酶的高分辨率三维结构，揭示了病毒复制机制的 DNA 合成、校对和碱基切除修复的活性位点，为开发抗猴痘药物提供了结构基础。图 1：来源Cell Research2.Nature：张锋团队开发全新蛋白质递送系统递送是基因编辑的主要瓶颈之一，使脑部或者肾脏疾病无法得到有效治疗。2023 年 3 月 30 日，麻省理工学院博德研究所和哈佛大学张锋团队在Nature杂志发表研究论文Programmable protein delivery with a b

骨关节炎（OA）是最常见的关节炎形式，全球残疾的主要原因之一。目前的 OA 治疗策略侧重于对症治疗，尚无有效的疾病缓解治疗来阻止、减缓或逆转 OA 的进展。二甲双胍是双胍类降糖药，通过抑制肝糖异生和增加肌肉胰岛素敏感性的机制降低血糖，是 2 型糖尿病的一线治疗药物。此外，据报道二甲双胍具有抗炎、抗衰老、抗癌、促减肥和免疫调节作用，亦有研究结果表明，二甲双胍可能有助于治疗或预防骨关节炎，但缺乏可靠的流行病学数据。2019 年发布于Annals of the Rheumatic Diseases的一项动物实验发现二甲双胍可通过激活 AMPK 信号来限制 OA 的发生和发展。二甲双胍在阻止 OA 的发生发展同时，还可缓解小鼠 OA 相关的疼痛敏感性，其对软骨保护作用主要是通过激活 AMPK 信号，同时二甲双胍对灵长类动物关节软骨具有保护作用，提示二甲双胍可在临床用于治疗 OA 患者。近期，一项发表于JAMA Network Open一项大型的全国性（美国）回顾性队列研究，评估了接受二甲双胍与磺脲类药物治疗的糖尿病患者发生 OA 和关节置换的风险。图片来源：文献截图>>研究设计和方

很长一段时间以来，无论是哲学家、心理学家还是经济学家都曾思考过一个问题——金钱可以买到幸福吗？其实关于这一论题的研究，从未断过。2010 年 4 月，诺贝尔经济学奖得主、来自美国普林斯顿大学的Daniel Kahneman在《美国国家科学院院刊》（PNAS）发表了一项研究，研究显示，能换来幸福的金钱是存在上限的，上限为 75000 美元（约合人民币 517972 元）。当家庭年收入低于这个数字，人们幸福感会降低，但如果超出这个数字，收入增长已无法再提升人们的幸福感，即出现幸福高原现象[1]。幸福高原是指在人们达到一定的收入或物质财富水平后，个人的幸福感或生活满意度不会显著增加。当下，这项研究因持续的热度在各类社交平台引发无数讨论，甚至一度成为流行心理学的宠儿。2021 年，来自加州大学伯克利分校的Matthew A. Killingsworth 另一项发布在 PNAS 的新研究却推翻了这一结论，研究发现在收入超过 75000 美元后，人们的幸福感仍能稳步提升，没有停滞的迹象[2]。为了深入厘清这两者的关系，Daniel 和 Matthew 联手合作开展了这项对抗性合作（对抗性合作旨在通

如果能够将特定的蛋白质输送到特定的细胞类型中，将为生命科学研究以及疾病治疗提供巨大的潜力。然而，试图靶向感兴趣的细胞类型和能够将所选择的蛋白质跨细胞膜运输所带来的各种挑战使得此类工具的开发成为一项艰巨的任务。在自然界中，一些内共生细菌已经演化出了复杂的递送系统，可以与寄主细胞互动。例如，细胞外收缩注射系统 (eCISs) 是一种类似注射器的大分子复合物，能够通过驱动一个刺突穿过细胞膜，将蛋白质注射到细胞里。最近，研究发现 eCISs 可以靶向小鼠细胞，提高了这一系统可用于治疗性蛋白质传递的可能性。然而，eCISs 是否能在人类细胞中发挥作用，以及这些系统用来识别目标细胞的机制尚不清楚。今日，博德研究所/哈佛医学院/麻省理工学院的张锋团队在最新一期的Nature杂志上发表了相关研究Programmable protein delivery with a bacterial contractile injection system。该研究报告开发了一种可编程的蛋白质递送系统。他们利用天然细菌系统开发了一种新的蛋白质递送装置，利用细菌「注射器」将蛋白质注射到人类细胞和动物中。对这一系统进行调

2023 年 3 月 27 日，礼来制药宣布，旗下产品 JAK 抑制剂巴瑞替尼（商品名：艾乐明®）正式获得中国国家药监局（NMPA）批准，用于成人重度斑秃的系统性治疗，是国内首个且唯一用于系统性治疗重度斑秃的创新靶向药物[1]。值得一提的是，该药品已于去年 6 月获得美国食品和药物管理局（FDA）批准上市，是美国首款批准用于治疗斑秃的口服疗法。斑秃，俗称脱发，是一种自身免疫性疾病，患者的免疫系统会攻击自身的毛囊，导致头发脱落，且通常成团。近年来，斑秃的患病率呈现逐年升高的趋势，严重者进展为全秃或普秃。重度斑秃顽固、难治、易复发，且严重影响患者的心理健康和生活质量，既往治疗基本上口服和外用激素，虽然有一定疗效，但是也有很多副作用，多数患者对治疗不满意。巴瑞替尼是一款每日口服一次的 JAK 抑制剂，有 4 mg、2 mg 和 1 mg 三种剂量。作为国内首个且唯一用于系统性治疗重度斑秃的创新靶向药物，可帮助患者获得显著的毛发再生，对头发、眉毛、睫毛等区域具有持续性的显著改善作用。NEJM 两项 III 期临床数据证实，可使 80% 头发恢复生长2022 年 5 月 5 日，礼来公司曾在《新

上海交通大学化学化工学院樊春海、左小磊团队近期发展了框架核酸生物传感平台，在此基础上研制了可用于疾病分型的分类器，并通过对多维度生物标志物（核酸、蛋白质以及小分子）的分类分析实现了前列腺癌精准诊断。该成果近日发表于《自然·纳米技术》（Nature Nanotechnology）。可准确反映患者生理病理状态的分子分型是发展精准医学的基础。近年来，研究者利用 DNA 分子反应发展了一系列基于单一维度生物标志物的分子分类器，例如 mRNA 分子分类器以及 microRNA 分子分类器。但疾病的发生发展与核酸、蛋白质、代谢小分子等多维度生物分子相关，迫切需要构建基于多维度生物标志物分子的分类器。由于不同维度的生物标志物分子具有高度的异质性，构建多维度生物标志物分子分类器存在很大挑战。针对这一挑战性问题，研究团队基于框架核酸的可编程特性发展了类原子精度的信号报告体系（PAN reporter）（图 1），可将多维度生物标志物分子结合事件进行信号转化与统一，进一步可实现多维生物标志物分子信息高精度的权重赋予与信号转化。研究发现，该信号报告体系，可在单分子、单颗粒水平实现对荧光分子、酶分子以及纳米颗